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CpG-ODN对流感病毒裂解疫苗免疫应答的影响

作　者: 罗兴
导　师: 于三科；许洪林
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 流感病毒 裂解疫苗 佐剂 CpG-ODN 黏膜免疫 体液免疫 细胞免疫
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


虽然目前广泛使用的流感疫苗能够较为有效地预防和控制流感流行,但仍存在流感大流行时疫苗产能不足和季节性流感病毒疫苗免疫效果有待改善等问题。疫苗佐剂的合理使用为有效地解决这些问题提供了思路。本论文研究了新型疫苗佐剂CpG-ODN对流感病毒裂解疫苗体液免疫和细胞免疫效果的影响,为今后研制新佐剂流感疫苗奠定了基础。在本研究中以2009 H1N1流感病毒裂解疫苗为抗原,分别以CpG-ODN、CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂以及CpG-ODN和ISA720复合佐剂为疫苗佐剂,通过肌肉注射和滴鼻免疫BALB/c小鼠,通过ELISA、血凝抑制试验和假病毒中和试验等方法评价体液免疫效果,通过ELISPOT、胞内细胞因子染色和体内CTL杀伤等方法评价细胞免疫效果。肌肉免疫结果表明,CpG-ODN单佐剂能够在一定程度上增强体液免疫,2针免疫后不同抗原剂量组中抗原特异性IgG抗体滴度、血凝抑制抗体滴度和中和抗体滴度分别提高3～6倍、2～4倍和4～8倍。CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂具有更强的佐剂效应,2针免疫后不同抗原剂量组中抗原特异性IgG抗体滴度、血凝抑制抗体滴度和中和抗体滴度分别提高23～57倍、9～20倍和16～64倍。根据体液免疫结果,CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂能够使流感病毒裂解疫苗的抗原用量降低至少16倍。CpG-ODN单独使用时并不能增强流感病毒裂解疫苗的细胞免疫应答,而CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂不但能够促进抗原特异性CD4~+ T细胞的IFN-γ分泌,而且能够促进抗原特异性CD8~+ T细胞的CTL杀伤活性。黏膜免疫结果表明,CpG-ODN单佐剂能够增强流感病毒裂解疫苗的体液免疫应答,2次免疫后血清中抗原特异性IgG抗体滴度与无佐剂组相比提高10倍,并且血清和黏膜局部均可检测到抗原特异性IgA抗体。同时,CpG-ODN还能够在一定程度上增强细胞免疫应答,不但能够促进抗原特异性CD4~+ T细胞的IFN-γ分泌,而且能够促进抗原特异性CD8~+ T细胞CTL杀伤活性。与CpG-ODN单佐剂相比,CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂以及CpG-ODN和ISA720复合佐剂并未显示出更强的佐剂效应。综上所述, CpG-ODN单独作为流感病毒裂解疫苗黏膜佐剂能够诱生黏膜局部免疫、系统性体液免疫和细胞免疫,而CpG-ODN和氢氧化铝复合佐剂作为流感病毒裂解疫苗肌肉免疫佐剂能够明显增强体液免疫和细胞免疫应答并显著降低抗原用量。

全文目录


摘要  5-7
ABSTRACT  7-11
文献综述  11-20
  第一章 流感疫苗的研究进展  11-20
    1.1 流感病毒的分子生物学特征及其危害  11-12
      1.1.1 流感病毒的分子生物学特征  11
      1.1.2 流感病毒的致病性  11-12
      1.1.3 流感病毒的流行性  12
    1.2 流感疫苗的使用现状  12-18
      1.2.1 流感病毒灭活疫苗  13
      1.2.2 流感病毒减毒活疫苗  13-14
      1.2.3 现行流感疫苗存在的问题  14-15
      1.2.4 流感疫苗的研究进展  15-18
    1.3 本课题研究内容  18
    1.4 展望  18-20
试验研究  20-48
  第二章 CPG-ODN 对流感病毒裂解疫苗肌肉注射免疫应答的影响  20-36
    2.1 材料  20-22
      2.1.1 仪器和设备  20-21
      2.1.2 质粒  21
      2.1.3 主要试剂  21-22
      2.1.4 常用溶液配方  22
      2.1.5 实验动物  22
    2.2 方法  22-27
      2.2.1 动物免疫  22-23
      2.2.2 间接ELISA  23
      2.2.3 血凝抑制试验  23
      2.2.4 流感病毒假病毒的制备  23-24
      2.2.5 流感病毒假病毒的滴定  24
      2.2.6 假病毒中和试验  24
      2.2.7 脾细胞的制备  24-25
      2.2.8 ELISPOT  25
      2.2.9 Th1 细胞标记  25-26
      2.2.10 体内CTL 杀伤  26
      2.2.11 统计学处理  26-27
    2.3 结果  27-34
      2.3.1 H1N1 病毒抗体测定结果  27-29
      2.3.2 血凝抑制抗体测定结果  29-30
      2.3.3 假病毒中和抗体测定结果  30-31
      2.3.4 IFN-γ分泌细胞数量变化的测定结果  31-32
      2.3.5 Th1 细胞数量变化的测定结果  32-33
      2.3.6 H1N1 特异性CTL 杀伤测定结果  33-34
    2.4 讨论  34-35
    2.5 小结  35-36
  第三章 CPG-ODN 作为黏膜佐剂对流感疫苗免疫应答的影响  36-48
    3.1 材料  36
    3.2 方法  36-37
      3.2.1 动物免疫  36
      3.2.2 黏膜灌洗液的采集  36
      3.2.3 间接ELISA  36
      3.2.4 ELISPOT  36
      3.2.5 体内CTL 杀伤  36-37
    3.3 结果  37-47
      3.3.1 CpG-ODN 对体液免疫效果的影响  37-41
      3.3.2 CpG-ODN 对细胞免疫效果的影响  41-43
      3.3.3 CpG-ODN 对不同类型流感疫苗抗原黏膜免疫效果的影响  43-47
    3.4 讨论  47
    3.5 小结  47-48
结论  48-49
参考文献  49-55
致谢  55-56
作者简介  56

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学免疫学
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