学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

以异柠檬酸裂解酶为靶点筛选肽类抑制剂

作　者: 牛雪
导　师: 殷玉和
学　校: 长春工业大学
专　业: 有机化学
关键词: 结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶基因表达噬菌体肽库肽类抑制剂
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 16次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

结核病(tuberculosis)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium)引起的慢性传染性疾病,是一种世界范围内的流行性疾病,全球每年约有200多万人死于该疾病。已有的研究表明结核杆菌被巨噬细胞吞噬后,在巨噬细胞内转为持留状态,通过乙醛酸循环途径获取能量,维持其在宿主体内的长期持留存在。异柠檬酸裂解酶(isocitrate lyase, ICL)是乙醛酸循环反应途径中的关键限速酶之一,对结核杆菌维持其持留状态起着决定性作用,因此我们选择以异柠檬酸裂解酶作为研究新型抗结核药物的靶点。本研究成功的克隆表达了结核分枝杆菌H37Rv异柠檬酸裂解酶基因,并对其诱导表达条件和纯化条件进行了优化。最佳的诱导表达条件确定为在温度为20℃,IPTG终浓度为0.25mmol/L,诱导表达4h,ICL蛋白有最大表达量。以镍离子螯合型琼脂糖凝胶亲和层析柱纯化异柠檬酸裂解酶重组蛋白,以含300mmo1/L咪唑的洗脱缓冲液将目的蛋白洗脱下来,经SDS-PAGE鉴定,获得了纯度很高的ICL重组蛋白。通过对其酶学性质进行鉴定,确定获得了具有生物学活性的重组蛋白,重组ICL蛋白的比活力为24μmol·mg-1·min-1。以异柠檬酸裂解酶蛋白为靶蛋白,利用噬菌体七肽库筛选与异柠檬酸裂解酶特异性结合的噬菌体。本实验共经过四轮筛选,根据ELISA检测和DNA序列测定结果,最终确定用固相合成法合成以下三条七肽链,分别为106号：RHNPHQL;118号：IISGKDS; 331号：RAQFIWP。经质谱检测,所合成的三条七肽链均是正确的。将合成正确的三条七肽链分别与异柠檬酸裂解酶作用,检测所合成的肽对ICL的抑制作用。结果筛选所得三条七肽链对ICL的活性均有不同程度的抑制作用,抑制作用的检测结果为,118号肽对ICL的抑制作用最强,抑制率达到了47.94%,其次是106号肽,抑制率为44.57%,最后是331号肽,抑制率为38.82%。本研究为新型肽类抗结核药物的研究和发展提供了先导化合物,为新型抗结核药物的筛选和进一步的研究奠定了理论基础。

全文目录

摘要  2-3
Abstract  3-6
第一章绪论  6-12
  1.1 课题研究背景及意义  6-7
  1.2 异柠檬酸裂解酶简介  7-9
  1.3 噬菌体展示技术简介  9-11
  1.4 多肽类药物的研究进展及前景展望  11-12
第二章实验材料  12-15
  2.1 主要试剂及实验仪器  12-13
  2.2 常用试剂配制  13-14
  2.3 细菌菌株及质粒  14-15
第三章实验方法  15-23
  3.1 ICL蛋白的诱导表达及纯化  15-19
  3.2 噬菌体肽库筛选  19-21
  3.3 肽的固相合成  21
  3.4 ICL纯化蛋白的活性检测及合成多肽抑制作用的检测  21-23
第四章实验结果  23-31
  4.1 ICL蛋白的诱导表达及纯化结果  23-26
  4.2 噬菌体肽库筛选  26-28
  4.3 肽的固相合成  28
  4.4 ICL纯化蛋白的活性检测及合成肽抑制作用的检测结果  28-31
讨论  31-34
结论  34-35
致谢  35-36
参考文献  36-39
作者简介  39
攻读硕士学位期间研究成果  39-40

以异柠檬酸裂解酶为靶点筛选肽类抑制剂

内容摘要

全文目录

相似论文