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二甲氧苄啶对Wistar大鼠的毒理学研究

作　者: 苏士佳
导　师: 王玉莲
学　校: 华中农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 二甲氧苄啶急性毒性亚慢性毒性繁殖和致畸毒性最大未观察到有害作用剂量
分类号: S859.8
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

甲氧苄啶类化合物是一类具有抗菌增效作用的药物,二甲氧苄啶(Diaveridine,DVD)是其中具有代表性的一种药物。由于二甲氧苄啶上市的年代比较久远,缺少毒理学和药理学的相关资料,并且评价体系与现在不同,所以为了评价二甲氧苄啶的安全性,需要对其进行系统的毒理学试验,包括二甲氧苄啶的急性毒性、亚慢性毒性、繁殖和喂养致畸试验。并以此为基础计算每日容许摄入量(ADI)和安全浓度(SC),为二甲氧苄啶的临床使用提供基本的毒理学评价依据。1急性毒性试验选用SPF级Wistar大鼠雌雄各16只,采用Up-and-Down (UDP)法进行试验。二甲氧苄啶用0.25%的羧甲基纤维素钠(CMC)助溶制成混悬液,一次性灌胃染毒,观察14天内的中毒反应,根据统计分析软件AOT 425 Stat Pgm计算半数致死量和95%的可信限。试验得出雌性Wistar大鼠的LD5o为2330mg/kg b.w.,95%可信限为1798到4540mg/kg b.w.;雄性Wistar大鼠的LD5o为3100 mg/kg b.w.,95%可信限为2311到4080 mg/kg b.w.。按照急性毒性分级标准确定二甲氧苄啶为低毒性物质。290天喂养试验选用SPF级(?)Vistar大鼠170只,按体重随机分为5组饲喂13周。空白对照组饲喂不添加药物的空白饲料；其余4组剂量分别为二甲氧苄啶(DVD)23、230、1150、2000 mg/kg饲料。空白对照组和二甲氧苄啶2000 mg/kg饲料组每组雌雄各20只Wistar大鼠；二甲氧苄啶23、230、1150 mg/kg饲料组每组雌雄各15只Wistar大鼠,雌雄分笼饲养,饲养条件严格按照国际动物福利规定。各周称量大鼠体重及摄食量,计算饲料利用率。在试验中期各组宰杀雌雄大鼠各5只,试验末期各组宰杀雌雄大鼠各10只。空白对照组和二甲氧苄啶2000 mg/kg饲料组余下的雌雄大鼠饲喂基础饲料2周后安乐处死。取全血及血清进行血液学指标检验,尸体剖检和病理组织学检查。对主要脏器绝对重量和相对重量进行统计学比较分析。大鼠在整个试验期内,二甲氧苄啶23 mg/kg饲料组体重增长、饲料消耗量、饲料利用率、血常规指标、血液生化指标、器官相对重量和病理检查与空白相比均无显著差异(p>0.05)。二甲氧苄啶1150和2000 mg/kg饲料组生化指标与空白组相比ALP和K+出现具有病理学意义的升高。组织病理学检查发现肝脏仅中央静脉部分出现炎性淋巴细胞浸润,肾脏皮质和髓质部分均出现异常病变,肾上腺皮质部分出现水泡样病变。二甲氧苄啶230mg/kg饲料组从喂养实验的第3周开始大鼠的平均体重极显著低于空白对照组(p<0.01)；二甲氧苄啶1150 mg/kg和2000 mg/kg饲料组的大鼠从喂养实验的第1周开始平均体重极显著低于空白对照组(p<0.01),这个趋势一直保持到试验结束。二甲氧苄啶1150和2000 mg/kg饲料组雌性大鼠肝脏、肾脏和大脑相对重量显著大于空白对照组；雄性大鼠的肾、睾丸(带附睾)和大脑的相对重量显著大于空白对照组,血常规和其它生化指标均没有异常变化。组织病理学观察表明,二甲氧苄啶对Wistar大鼠亚慢性毒性作用的靶器官为肾脏。二甲氧苄啶亚慢性最大未观察到有害作用剂量(NOAEL)为23 mg/kg饲料。3二代繁殖试验选用健康非经产SPF级Wistar大鼠215只,按体重随机分为5组,在试验开始(F0代)时雌鼠每组各25只,雄性每组各18只(以保证每组20只受孕雌鼠)；在继续试验(Fl代)中雌鼠每组各30只,雄性20只。设空白对照组和二甲氧苄啶试验组,剂量为二甲氧苄啶23、230、1150、2000 mg/kg饲料。各剂量组饲喂13周后进行交配。试验期间统计分析母代及子代大鼠的体重、摄食量、繁殖指数等指标,对大鼠生殖系统进行组织病理学检查。二甲氧苄啶1150、2000 mg/kg饲料组F0代和F1代胎鼠体重和饲料利用率显著性低于空白对照组；孕鼠增重、窝平均活仔数和第0、4、7、14、21天平均仔重极显著低于空白对照组(p<0.01)。雄鼠生殖器官病理学各剂量组检查均正常,但是最高剂量组部分F1代雌鼠子宫壁出现萎缩、子宫腔缩小以及出现子宫肿瘤。二甲氧苄啶对大鼠生殖发育毒性的NOAEL为23 mg/kg饲料。4喂养致畸试验喂养致畸试验与二代繁殖试验F1代联合进行,将大鼠按随机分为5组,每组各30只雌鼠,20只雄鼠。设空白对照组和二甲氧苄啶试验组,剂量为二甲氧苄啶23、230、1150、2000 mg/kg饲料。各组均以设定剂量连续饲喂13周后交配,在妊娠第20天时进行剖腹检查畸胎。试验结果显示二甲氧苄啶1150和2000 mg/kg饲料组孕鼠增重、窝平均活仔数和第0、4、7、14、21天平均仔重极显著低于空白对照组p<0.01)。各组均未出现明显的与药物相关的外观和内脏畸形。二甲氧苄啶致畸试验NOAEL为23 mg/kg饲料。5计算每日容许摄入量(ADI)及安全浓度(SC)根据上述试验结果综合比较确定DVD的NOAEL为23 mg/kg饲料,按照FDA给出的ADI (acceptable daily intake)和SC (safe concentration)计算公式,计算得出二甲氧苄啶的每日容许摄入量(ADI)为0.0023 mg/kg b.w.,在肌肉、肝脏、肾脏、脂肪中的安全浓度(SC)分别为0.46、1.38、2.76、2.76 mg/kg。所有试验条件、设计与步骤均符合美国食品药品管理局(FDA)颁布的毒理学安全性评价原则、经济合作与发展组织(OECD)毒理学实验指导标准和兽药注册国际协调局(VICH)的新兽药安全性评价标准。对DVD的急性毒性、亚慢性毒性、繁殖致畸毒性进行了系统的毒理学评价。通过本研究可为二甲氧苄啶的临床使用提供相关的科学资料。

全文目录

摘要  8-11
ABSTRACT  11-15
缩略语  15-17
1 前言  17-23
  1.1 二甲氧苄啶研究概况  17-21
    1.1.1 药理毒理学研究  18
    1.1.2 药动学  18
    1.1.3 毒理学研究  18-19
    1.1.4 联合给药残留研究  19-21
  1.2 本试验的研究意义、内容与目标  21-23
2 材料和方法  23-34
  2.1 药物和实验动物  23
  2.2 主要试剂  23
  2.3 主要仪器  23-24
  2.4 试验动物及其饲养管理  24
  2.5 急性毒性试验  24-25
    2.5.1 试验方法  24-25
    2.5.2 剂量及分组  25
    2.5.3 结束原则  25
    2.5.4 观察指标  25
    2.5.5 结果计算  25
  2.6 90天喂养试验  25-28
    2.6.1 试验设计  26
    2.6.2 加药饲料的制备  26
    2.6.3 受试物给予方式  26-27
    2.6.4 大鼠处死  27
    2.6.5 检查项目  27
    2.6.6 数据的统计分析  27-28
  2.7 二代繁殖试验  28-30
    2.7.1 试验方法  28
    2.7.2 交配方法及检查项目  28-29
    2.7.3 结果统计  29-30
    2.7.4 数据处理  30
  2.8 喂养致畸试验  30-33
    2.8.1 试验方法  30
    2.8.2 试验步骤  30-31
    2.8.3 检查项目  31-33
    2.8.4 数据处理  33
  2.9 计算ADI和SC  33-34
3 结果  34-73
  3.1 急性毒性试验结果  34-35
  3.2 90天喂养试验结果  35-51
    3.2.1 一般观察  35
    3.2.2 体重  35-40
    3.2.3 摄食量  40
    3.2.4 饲料利用率  40-44
    3.2.5 血常规指标  44
    3.2.6 血清生化指标  44-45
    3.2.7 脏器系数  45-50
    3.2.8 病理学检查  50-51
  3.3 二代繁殖试验结果  51-72
    3.3.1 一般状况  51-52
    3.3.2 体重  52-60
    3.3.3 摄食量  60-61
    3.3.4 饲料利用率  61-62
    3.3.5 脏器系数  62-67
    3.3.6 繁殖试验各项指标  67-72
  3.4 喂养致畸试验结果  72
    3.4.1 一般状况  72
    3.4.2 致畸试验各项结果  72
  3.5 ADI和SC的计算  72-73
4 讨论  73-80
  4.1 急性毒性试验讨论  73
  4.2 90天喂养试验讨论  73-77
  4.3 二代繁殖与喂养致畸试验讨论  77-79
  4.4 ADI和SC  79-80
5 总结  80-81
文献综述  81-87
参考文献  87-92
致谢  92-93
附录  93-100

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