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白藜芦醇及其衍生物抗肿瘤作用及机制研究

作　者: 李刚
导　师: 景永奎
学　校: 沈阳药科大学
专　业: 药理学
关键词: 白藜芦醇衍生物 白血病 乳腺癌 凋亡 Mitotic Catastrophe
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


本论文以人白血病HL-60和K562细胞株,人乳腺癌MCF-7和MDA-MB231细胞株为体外模型,分别采用台盼蓝排斥法和MTT法对10种白藜芦醇衍生物的细胞生长抑制作用进行了考察,并应用吖啶橙(AO)—溴化乙锭(EB)荧光双染法,瑞氏和姬姆萨混合染色法,流式细胞术(Flow Cytometry)、蛋白免疫印迹技术(Western Blotting)对其抗肿瘤作用机制进行了初步探讨。台盼蓝排斥法和MTT法实验结果显示10个白藜芦醇衍生物在体外表现出明显的生长抑制作用。构效关系分析证明Bn活性最强。应用流式细胞术进一步考察化合物Bn及母体化合物白藜芦醇作用机制,发现化合物Bn在1.6μM可以使HL60细胞发生凋亡。而白藜芦醇在40μM可以诱导HL60细胞发生凋亡。提示两个化合物对HL-60细胞生长抑制作用可能是由于诱导凋亡引起的。蛋白质免疫印迹技术和流式细胞术的结果表明化合物Bn及白藜芦醇可以活化Caspase-8激活外源性凋亡通路,也有一定降低线粒体膜电位(MMP)激活内源性凋亡通路的作用。化合物Bn可以导致K562细胞阻滞在G2／M期,Bn长时间作用后导致K562细胞死亡,提示其生长抑制作用可能诱导Mitotic Catastrophe。蛋白质免疫印迹技术和流式细胞术的结果表明化合物Bn可以上调周期蛋白Cyclin B1, CDC2, P21和Survivin。化合物Bn对乳腺癌细胞有较强的生长抑制作用并阻滞细胞在G2／M期,提示其机制可能也与Mitotic Catastrophe诱导有关。综上所述,化合物Bn能够抑制白血病细胞、乳腺癌细胞生长,其活性远远强于白藜芦醇。Bn能够诱导肿瘤细胞发生Mitotic Catastrophe和凋亡,因此,其有望开发成为新型的抗肿瘤药物。

全文目录


摘要  10-11
Abstract  11-12
第一章 前言  12-19
  1.1 研究背景  12-17
    1.1.1 白藜芦醇  12-17
      1.1.1.1 白藜芦醇介绍  12
      1.1.1.2 白藜芦醇的抗癌药理作用  12-13
      1.1.1.3 白藜芦醇的抗癌药理作用机制  13-17
  1.2 立题依据,目的及意义  17-19
第二章 材料和方法  19-26
  2.1 实验材料  19-21
    2.1.1 细胞  19
    2.1.2 药品及试剂  19-20
    2.1.3 抗体  20
    2.1.4 试剂盒  20
    2.1.5 实验仪器  20-21
  2.2 实验方法  21-26
    2.2.1 细胞培养  21-22
    2.2.2 细胞生长抑制活性测定  22
    2.2.3 贴壁细胞活性测定(MTT法)  22-23
    2.2.4 AO/EB双染法考察细胞凋亡诱导活性  23
    2.2.5 PI染色法考察细胞周期变化  23
    2.2.6 细胞内过氧化氢(H202)水平检测  23
    2.2.7 线粒体膜电位检测  23-24
    2.2.8 蛋白免疫印迹技术  24
    2.2.9 瑞氏和姬姆萨混合染色法  24-25
    2.2.10 统计学方法  25-26
第三章 白藜芦醇及其衍生物抗肿瘤作用及构效关系探讨  26-30
  3.1 前言  26
  3.2 实验方法  26
  3.3 实验结果  26-28
    3.3.1 白藜芦醇及其衍生物对肿瘤细胞的生长抑制作用  26-28
  3.4 讨论  28-30
    3.4.1 白藜芦醇及其衍生物抗肿瘤的构效关系探讨  28-30
第四章 化合物Bn及白藜芦醇对白血病HL-60细胞生长抑制,诱导凋亡作用及其机制探讨  30-42
  4.1 前言  30
  4.2 实验方法  30-31
  4.3 实验结果  31-39
    4.3.1 化合物Bn及白藜芦醇对HL-60细胞的生长抑制和细胞毒作用  31-32
    4.3.2. 化合物Bn及白藜芦醇诱导HL-60细胞凋亡时的形态学变化  32
    4.3.3 化合物Bn及白藜芦醇诱导HL-60细胞凋亡的量效和时效关系  32-33
    4.3.4. Bn及白藜芦醇对HL-60细胞Sub-G1期影响的时效关系  33-35
    4.3.5 Bn及白藜芦醇对HL-60细胞Sub-G1期影响的量效关系  35-36
    4.3.6 Bn和白藜芦醇对HL-60细胞内H_2O_2含量的影响  36-37
    4.3.7 Bn和白藜芦醇对HL-60细胞内线粒体膜电位水平的影响  37-38
    4.3.8 化合物Bn及白藜芦醇对HL-60细胞凋亡相关蛋白表达的影响  38-39
  4.4 讨论  39-42
    4.4.1 化合物Bn及白藜芦醇对HL-60细胞的凋亡诱导作用  39-40
    4.4.2 化合物Bn及白藜芦醇诱导HL-60细胞凋亡的机制探讨  40-42
第五章 化合物Bn及白藜芦醇对白血病K562细胞生长抑制,诱导Mitoticcatastrophe作用及其机制探讨  42-54
  5.1 前言  42
  5.2 实验方法  42
  5.3 实验结果  42-51
    5.3.1 化合物Bn及白藜芦醇对K562细胞的生长抑制和细胞毒作用  42-43
    5.3.2.化合物Bn及白藜芦醇对白血病K562细胞周期影响的时效关系  43-46
    5.3.3 化合物Bn及白藜芦醇对白血病K562细胞周期影响的量效关系  46-48
    5.3.4 化合物Bn诱导白血病K562细胞mitotic的形态学变化  48-49
    5.3.5 化合物Bn及白藜芦醇对K562细胞周期相关蛋白表达的影响  49-51
  5.4 讨论  51-54
    5.4.1 化合物Bn及白藜芦醇对K562细胞的周期期阻滞作用  51-52
    5.4.2 化合物Bn诱导K562细胞发生Mitotic catastrophe的机制探讨  52-54
第六章 化合物Bn对乳腺癌细胞生长抑制,周期阻滞作用探讨  54-58
  6.1 前言  54
  6.2 实验方法  54
  6.3 实验结果  54-57
    6.3.1 化合物Bn及白藜芦醇对乳腺癌细胞株的生长抑制作用  54-55
    6.3.2 化合物Bn对MCF-7细胞周期影响的时效关系  55-57
  6.4 讨论  57-58
    6.4.1 白藜芦醇衍生物Bn对乳腺癌细胞的生长抑制作用  57
    6.4.2 白藜芦醇衍生物Bn对乳腺癌细胞生长抑制作用的机制探讨  57-58
结论  58-59
参考文献  59-63
致谢  63

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学
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