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灵芝三萜组分GLZ的体内外抗肿瘤作用研究

作　者: 刘锋
导　师: 许建华
学　校: 福建医科大学
专　业: 药理学
关键词: 抗肿瘤转移 S180 SW620 CNE2 P-MEK
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

目的通过体内外实验，评价灵芝三萜组分GLZ的抗肿瘤活性，并对其抗肿瘤作用机制进行初步的探讨，为研究开发灵芝抗肿瘤中药奠定基础。方法(1)采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法体外检测GLZ对鼻咽癌肿瘤细胞的生长抑制作用。(2)建立小鼠S180实体瘤和腹水瘤两种模型，观察GLZ对实体瘤抑瘤率和腹水瘤生命延长率的影响，评价GLZ的小鼠体内抗肿瘤活性。(3)建立裸小鼠HepG-2人肝癌、MDA-MB-231人乳腺癌、SW620人结肠癌、HT-29人结肠癌、HCT116人结肠癌和CNE2人鼻咽癌移植瘤模型，评价GLZ在裸小鼠体内抗肿瘤活性。(4)应用Western blot法检测GLZ对人鼻咽癌CNE2细胞中增殖凋亡相关信号分子的影响。(5)应用Western blot法检测GLZ对裸小鼠人结肠癌SW620肿瘤组织中增殖凋亡相关信号分子的影响。(6)采用Transwell小室法检测GLZ对人肝癌细胞SMMC7721侵袭运动能力的影响；利用重组基底膜侵袭实验检测GLZ对SMMC7721粘附能力的影响。(7)利用MTT法检测GLZ对人脐静脉内皮细胞ECV-304的增值能力的影响，采取划痕试验检测GLZ对ECV304迁移能力的影响。结果(1) GLZ对人鼻咽癌高分化细胞CNE1抑制作用较弱，但对低分化细胞CNE2有一定的抑制作用，作用CNE2细胞48h和72h的IC50值分别是26.2μg/ml和15.8μg/ml。(2)灵芝三萜组分GLZ3个剂量组对S180实体瘤小鼠均具有一定的抑制作用(P<0.05)，500mg/kg组的瘤重抑制百分率达51.4%；对S180腹水瘤小鼠具有明显的延长存活期作用，500mg/kg组的生命延长率为52.0%(P<0.05)。(3) GLZ500mg/kg，GLD500mg/kg和GLH320mg/kg口服每天给药后，对裸小鼠HepG-2人肝癌移植瘤的抑制率分别达到了18.8%，11.9%，29.6%(P>0.05)；GLZ500mg/kg口服每天给药后，对裸小鼠CNE2人鼻炎癌移植瘤的抑制率为36.6%(P<0.05)；GLZ250mg/kg和500mg/kg，1g/kg3个剂量对裸小鼠SW620人结肠癌移植瘤均具有一定的抑制抑制作用，抑瘤率分别达到了49.5%，60.3%，52.6%(P<0.05)；GLH320mg/kg口服每天给药后对裸小鼠SW620人结肠癌移植瘤的抑制率为52.7%(P<0.05)；GLH200mg/kg口服每天给药后对裸小鼠SW620人结肠癌移植瘤的抑制率为44.1%(P<0.05)；GLZ500mg/kg口服每天给药后对裸小鼠HT-29人结肠癌移植瘤的抑制率为49.4%(P<0.05)；GLZ500mg/kg口服每天给药后对裸小鼠HCT116人结肠癌移植瘤的抑制率为58.6%(P<0.05)；GLZ500mg/kg口服每天给药后对裸小鼠MDA-MB-231人乳腺癌移植瘤的抑瘤率为-14.3%(P>0.05)。(4)不同浓度的GLZ作用于CNE2细胞后，抗凋亡蛋白Bcl-2呈剂量依赖性减少，虽然总的MEK、ERK蛋白表达未发生变化，但是它们的磷酸化水平受到影响，P-MEK和P-ERK呈剂量依赖性的减少，然后影响到细胞核内的c-myc和NF-κB的表达水平。(5)不同剂量组的GLZ作用于人结肠癌SW620裸鼠移植瘤后，将瘤组织用于免疫印迹，发现随着给药剂量的增加，P-MEK的表达量逐渐减少，而Bax表达逐渐增多，并呈现剂量依赖关系。(6)经过不同浓度(50μg/ml、100μg/ml)GLZ处理一定时间后，SMMC7721细胞的侵袭能力和运动能力均低于对照组。100μg/ml GLZ的侵袭抑制率和迁移抑制率分别达到了84.4%和76.0%(P<0.05)；150μg/ml GLZ对SMMC7721的粘附抑制率为62.2%(P<0.05)。(7) GLZ能一定程度抑制人脐静脉内皮细胞ECV-304的增值，作用48h后的IC50值为61.13μg/ml；人脐静脉内皮细胞ECV304在经过100μg/mlGLZ处理后，细胞的运动能力得到一定程度的下降。结论(1)灵芝三萜组分GLZ对人鼻咽癌高分化细胞CNE1抑制作用较弱，而对低分化细胞CNE2有一定的抑制作用。(2) GLZ对小鼠肉瘤S180的生长有一定的抑制作用。(3)裸鼠移植瘤实验表明：口服给予GLZ干预后，对裸小鼠HepG-2人肝癌、SW620人结肠癌、HT-29人结肠癌、CNE2人鼻咽癌、HCT116人结肠癌细胞的生长，均起到了一定的抑瘤效果，而对MDA-MB-231人乳腺癌移植瘤的治疗效果并不敏感。(4) GLZ在体外能有效抑制鼻咽癌CNE2的生长并促进其凋亡，其作用机制可能是下调了MEK/ERK/c-myc、NF-κB信号转导通路，同时还下调细胞内Bcl-2的水平。(5) GLZ在体内能够抑制SW620生长并促进其凋亡，其机制可能是下调了MEK/ERK/c-myc信号通路，从而影响了细胞增殖及凋亡相关蛋白的表达，最终抑制其生长。(6) GLZ能在一定程度上抑制了肿瘤细胞SMMC7721的粘附及迁移侵袭运动，可以干扰侵润和转移。(7) GLZ能直接抑制人脐静脉内皮细胞ECV304的增殖，也可一定程度地抑制内皮细胞的迁移，因而具有干扰血管生成的作用，从而达到抗肿瘤转移的目的。

全文目录

英文缩略词表  4-5
中文摘要  5-8
Abstract  8-11
前言  11-13
第一部分灵芝三萜组分 GLZ 体外对肿瘤细胞的抑制作用  13-16
  1 材料  13-14
    1.1 药物与试剂  13
    1.2 实验仪器  13
    1.3 主要试剂的配制  13
    1.4 细胞株及培养条件  13-14
  2 方法  14
    2.1 样品溶液的制备  14
    2.2 GLZ 对鼻咽癌细胞增殖能力的影响  14
  3 结果与讨论  14-16
第二部分灵芝三萜组分 GLZ 体内抗肿瘤实验  16-32
  第一节 GLZ 对小鼠 S180 移植瘤的抗肿瘤作用  16-19
    1 材料  16
    2 方法  16-17
    3 结果  17-18
    4 讨论  18-19
  第二节 GLZ 对裸鼠移植瘤的抗肿瘤作用  19-32
    1 材料  19
    2 方法  19-20
    3 结果  20-30
    4 讨论  30-32
第三部分灵芝三萜组分 GLZ 抗肿瘤作用机制的初步探讨  32-47
  第一节 GLZ 对人鼻咽癌 CNE2 肿瘤细胞增殖凋亡相关信号分子的影响  32-37
    1 材料  32-33
    2 方法  33-35
    3 结果  35-36
    4 讨论  36-37
  第二节 GLZ 对裸小鼠人结肠癌 SW620 肿瘤组织增殖凋亡相关信号分子的影响  37-38
    1 材料与方法  37
    2 结果与讨论  37-38
  第三节 GLZ 对肿瘤侵袭转移的影响  38-47
    一、GLZ 体外对人肝癌细胞 SMMC7721 侵袭转移的影响  38-43
      1 材料  38-39
      2 方法  39-40
      3 结果  40-42
      4.讨论  42-43
    二、GLZ 对人脐静脉内皮细胞 ECV304 增值和迁移能力的影响  43-47
      1 材料  43-44
      2 方法  44-45
      3 结果  45-46
      4 讨论  46-47
参考文献  47-51
致谢  51-52
文献综述  52-57
  参考文献  56-57

灵芝三萜组分GLZ的体内外抗肿瘤作用研究

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