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胆南星发酵炮制工艺研究

作　者: 唐思园
导　师: 史新元
学　校: 北京中医药大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: HPLC-ELSD 胆南星胆酸发酵炮制发酵工艺
分类号: R283
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

发酵法在我国已有几千的历史,在汉晋年间开始进行中药药物发酵后,该法已成为中药炮制的方法之一。传统的中药发酵炮制方法通常是在常温常压条件下,利用自然环境中的微生物进行的固体发酵,未对温度、湿度等条件进行控制,发酵周期较长。该法虽然在饮片生产中发挥了重要作用,但其产品质量随着环境条件的变化而波动,可控性较差。现代中药发酵技术是在传统发酵法的基础上,对其菌种及发酵条件进行控制,可定向改变药物的性能,或根据药物之间的特性有目的地进行组合,利用单一菌种或混合菌种定向发酵。采用现代发酵技术进行中药发酵炮制,将有利于规范发酵饮片的生产工艺,提升中药发酵炮制品的质量及生产效率。本文以制天南星与胆汁混合发酵制得的传统曲剂——胆南星作为研究载体,针对胆南星发酵的工艺条件进行研究,以胆南星中的主要指标性成分胆酸类化合物为指标,对胆南星的最佳发酵条件进行考察,在此基础上探讨了发酵过程中胆酸类物质的变化,初步阐释发酵炮制的作用机理,为发酵对中药有效成分的影响研究提供了参考。本文的研究工作主要包括以下几部分内容：1.建立了胆南星中胆酸类物质的定性定量分析方法,以指导发酵条件的优化。首先采用紫外-可见分光光度法对发酵原料牛胆粉样品进行胆酸含量的初步测定。由于胆酸对紫外光只有微弱的吸收,灵敏度不高,稳定性较差,且只能测得总胆酸含量,不能对单一组分进行定量分析,本文采用HPLC-UV及HPLC-ELSD法进行了胆南星中胆酸类物质的定量分析方法研究,结果表明HPLC-ELSD去所得色谱峰基线稳定,简便稳定且重复性好,可用于对胆南星中胆酸和去氧胆酸的含量测定。此外,本文采用LC-MS法对胆南星中所含胆酸类物质的类别进行了考察,结果表明在牛胆粉和胆南星样品中含有胆酸和去氧胆酸两种化合物。2.对胆南星的发酵工艺进行了研究。以《中华本草》中的胆南星炮制方法为基础,考察了发酵原料、温度和湿度对发酵结果的影响。实验结果表明,牛胆粉样品中胆酸含量为1.8%,去氧胆酸含量为0.73%；牛胆汁样品中含有的胆酸含量为0.742%。以牛胆粉为原料37℃条件下发酵的胆南星样品中去氧胆酸含量为3.04%-4.63%之间不等,常温条件下发酵的胆南星中去氧胆酸含量为1.9%-2.9%之间不等；以牛胆汁为原料37℃条件下培养的胆南星样品中胆酸含量为3.61%-7.42%之间不等,以牛胆汁为原料的常温条件下发酵的胆南星中去氧胆酸含量为1.2%-4.7%之间不等,但几乎检测不到去氧胆酸的存在。在不同的湿度条件下,以牛胆粉为原料的胆南星在不控湿条件下所得胆酸类物质含量较高,儿以牛胆粉为原料的胆南星则是在25%RH条件下所得胆酸类物质含量较高。随着时间的发展,无论何种条件下的胆酸类物质的含量逐渐增加,达到72小时以后,含量变化趋于平缓。从结果中,可以得出,以牛胆粉为原料,在37℃下干燥发酵可以得到胆酸和去氧胆酸的含量最高。本结果可以作为对胆南星发酵工艺优化的实验依据。3.本文采用显微染色照相的方法,以成品胆南星作为研究载体,对发酵菌种进行了初步的探究。实验结果表明,在胆南星发酵成品中,可能含有杆状细菌,对于具体菌种的鉴定,还需要进一步的考察。上述研究表明,采用不同原料进行胆南星发酵炮制,其发酵结果不同；同样原料在不同条件下所得发酵产品的质量也存在差异,在37℃干燥条件下,对以牛胆粉为原料的胆南星进行发酵,可以得到含有较高含量胆酸类物质的胆南星发酵产物,研究结果可为胆南星发酵工艺条件的优选及质量控制提供参考。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-9
缩略词表  9-10
第一部分文献综述  10-24
  1 中药发酵炮制的应用与研究进展  10-19
    1.1 中药发酵的背景  10-12
    1.2 中药发酵的工艺  12-14
    1.3 中药发酵的优势  14-15
    1.4 中药发酵的应用  15-17
    1.5 中药发酵的共同问题和展望  17-19
  2 胆南星炮制的应用与研究进展  19-21
    2.1 胆南星的背景发展  19
    2.2 胆南星的现代应用与研究  19-21
  参考文献  21-24
第二部分实验研究  24-64
  前言  24-25
  第一章胆南星有效成分检测的方法学研究  25-41
    前言  25
    第一节胆酸含量紫外-可见分光光度测定方法研究  25-29
      材料和方法  25-26
      结果  26-28
      讨论  28-29
    第二节胆酸类物质HPLC及LC-MS分析方法研究  29-41
      材料和方法  29-31
      结果  31-40
      讨论  40-41
  第二章胆南星发酵工艺的方法学研究  41-59
    前言  41
    材料和方法  41-43
    结果  43-57
    讨论  57-59
  第三章胆南星发酵菌种的考察  59-63
    材料与方法  59-60
    结果  60-62
    讨论  62-63
  参考文献  63-64
第三部分结论  64-65
致谢  65-66
个人简历  66

胆南星发酵炮制工艺研究

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