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橡胶树白粉病生防菌研究

作　者: 黄有航
导　师: 张荣意
学　校: 海南大学
专　业: 植物病理学
关键词: 橡胶树白粉病芽孢杆菌鉴定定殖优化条件
分类号: S763.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

从橡胶树根际土壤分离出菌株276株,并从中筛选出对橡胶树白粉病具有较好拮抗作用的菌株2株,标记为S43、S55。对两株拮抗菌进行形态观察、培养性状、生理生化性状分析及16S rDNA序列分析,确定了2株拮抗菌的分类地位,均为枯草芽孢杆菌。菌株S43、S55的不同浓度发酵液对白粉病菌孢子抑制试验和盆栽试验的结果表明：随着发酵液浓度的增加,孢子萌发抑制率和防效均提高。当两者发酵液浓度为20%时即可很好的抑制白粉病孢子萌发,萌发抑制率均达80%,盆栽试验的防效也达到80%。将拮抗菌株的发酵液和菌悬液通过三种处理方法(接种白粉菌前24h喷施、接种白粉菌时喷施和接种白粉菌后48h喷施)喷施于橡胶树叶片。通过接种S43、S55培养液,橡胶树叶片内的PPO、POD活性比对照大一倍,由此说明菌株S43、S55可诱导植物体产生防御酶。同时,分别测得拮抗菌对白粉病的防效。三种处理方法菌株S43发酵液防效分别为84.62%、76.53%、43.32%,而菌悬液防效较差,其防效分别为57.32%、56.56%、21.02%；三种处理方法菌株S55发酵液防效分别为82.35%、80.57%和57.94%,而菌悬液防效也较差,防效分别为57.76%、57.74%、32.29%。结果表明：(1)接种前24h喷施发酵液与接种时同时喷施发酵液和菌悬液的防效显著高于接种后48h喷施发酵液和菌悬液；(2)喷施发酵液比菌悬液效果好；(3)菌株S43和S55的发酵液对白粉病都具有很好的防效,但S43发酵液比S55发酵液的防效好。通过采用伤叶和不伤叶接种方式研究菌株S43和S55在橡胶叶片上的定殖规律。研究表明,编号菌株S43*和S55*在叶片上接种一天后定殖量最大,但随着时间的推移其定殖量逐渐减少,并在15d后基本趋于稳定。在接种初期,伤叶处理的菌株定殖量比不伤叶处理的菌株定殖量大一倍,但两种方式处理后的菌株定殖量最终无显著差异。对拮抗菌株S43发酵条件进行初步优化,优化培养基为：蔗糖1.5%、蛋白胨0.66%,酵母浸膏0.33%；发酵条件为：pH为7.0、摇床转速150r/min、温度30℃,种子培养液接种量2%、培养基与空气的比为2：5、最佳接种种龄为14-30h；最佳发酵时间36-72h。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-7
目录  7-10
第1章前言  10-18
  1.1 天然橡胶和橡胶树白粉病  10-13
    1.1.1 橡胶基本概况  10
    1.1.2 我国现植橡胶主要推广品种  10
    1.1.3 橡胶树白粉病的发生与危害  10-11
    1.1.4 橡胶树白粉病的防治  11-13
  1.2 枯草芽孢杆菌及其生防机制  13-16
    1.2.1 枯草芽孢杆菌  13-14
    1.2.2 枯草芽孢杆菌的生防机制  14-16
  1.3 定殖检测方法  16-17
    1.3.1 抗生素标记法  16
    1.3.2 免疫学法  16-17
    1.3.3 基因标记法  17
    1.3.4 特异性寡糖核苷酸片段标记法  17
    1.3.5 荧光标记法  17
  1.4 本研究的目的及意义  17-18
第2章橡胶树白粉病拮抗菌的筛选和鉴定  18-30
  2.1 材料  18
  2.2 方法  18-25
    2.2.1 拮抗菌的分离  18
    2.2.2 拮抗菌的筛选  18-20
    2.2.3 拮抗菌的鉴定  20-25
  2.3 结果与分析  25-29
    2.3.1 拮抗菌的分离结果  25-26
    2.3.2 拮抗菌的形态特征  26
    2.3.3 拮抗菌生理生化测定  26-27
    2.3.4 拮抗菌碳、氮源测定  27-28
    2.3.5 拮抗菌的16S rDNA序列分析及系统进化树的构建  28-29
  2.4 结论与讨论  29-30
第3章拮抗菌株S43、S55对橡胶树白粉的生物防治  30-37
  3.1 材料  30
  3.2 方法  30-31
    3.2.1 S43、S55培养及发酵液的制备  30
    3.2.2 不同浓度S43、S55发酵液对白粉病孢子萌发的影响  30
    3.2.3 不同浓度发酵液对白粉病的防效试验  30
    3.2.4 不同浓度菌悬液对白粉病的防效试验  30
    3.2.5 不同处理方法对白粉病的防效试验  30-31
    3.2.6 拮抗菌S43、S55处理后橡胶防御酶的变化  31
  3.3 结果与分析  31-35
    3.3.1 不同发酵液浓度对孢子萌发的影响  31-32
    3.3.2 不同浓度发酵液对白粉病的防效  32-33
    3.3.3 不同浓度拮抗菌菌悬液对白粉病的防效  33
    3.3.4 不同处理方法对白粉病的防效  33-34
    3.3.5 拮抗菌株处理后防御酶的变化  34-35
  3.4 结论与讨论  35-37
第4章拮抗菌株在橡胶上的定殖规律  37-43
  4.1 材料  37
  4.2 方法  37-38
    4.2.1 利福平母液的配制  37
    4.2.2 拮抗菌株天然抗药性测定  37
    4.2.3 拮抗菌抗利福平标记  37
    4.2.4 S43~*、S55~*的抗药稳定性  37-38
    4.2.5 S43~*、S55~*对橡胶树白粉病的拮抗作用  38
    4.2.6 S43~*、S55~*在橡胶叶片上的定殖状况  38
    4.2.7 S43~*、S55~*处理叶芽上定殖状况  38
    4.2.8 标记菌的分离  38
  4.3 结果与分析  38-41
    4.3.1 拮抗菌株天然抗药性  38-39
    4.3.2 抗利福平菌株的获得  39
    4.3.3 S43~*、S55~*与原始菌株对橡胶树白粉病病拮抗性的比较  39
    4.3.4 菌株S43~*在橡胶叶片上的定殖动态  39-40
    4.3.5 菌株S55~*在橡胶叶片上的定殖动态  40-41
    4.3.6 菌株S43~*、S55~*在橡胶叶芽中的定殖动态  41
  4.4 结论与讨论  41-43
第5章生防菌株S43发酵条件初步优化  43-49
  5.1. 材料  43
  5.2 方法  43-44
    5.2.1 种子培养液的制备  43
    5.2.2 转速测定  43
    5.2.3 接种量测定  43
    5.2.4 通气量测定  43-44
    5.2.5 不同含碳物质对菌株生长的影响  44
    5.2.6 不同含氮物质对菌株生长的影响  44
    5.2.7 S43发酵条件优化  44
    5.2.8 比浊法测定生长曲线  44
  5.3 结果与分析  44-48
    5.3.1 转速对生长的影响  44-45
    5.3.2 接菌量对生长的影响  45
    5.3.3 通气量对生长的影响  45
    5.3.4 不同含碳物质对S43生长以及拮抗物质的产量的影响  45-46
    5.3.5 不同含氮物质对S43生长以及拮抗物质的产量的影响  46
    5.3.6 S43发酵条件优化  46-47
    5.3.7 比浊法测定S43的生长曲线  47-48
  5.4 结论与讨论  48-49
项目资助  49-50
参考文献  50-57
致谢  57-58
附录一  58-60
附录二  60-61

橡胶树白粉病生防菌研究

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