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鸡源产酶芽孢杆菌菌株的筛选鉴定及饲喂效果研究

作　者: 李卓伟
导　师: 朱宝成
学　校: 河北农业大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 芽孢杆菌筛选鉴定体外评价产芽孢条件优化肉鸡饲喂
分类号: S831.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

肉鸡的养殖饲料成本约占整个养鸡总成本的70%以上，是影响其成本开支的重要项目。由于在肉鸡在现实中的饲养管理，配合和使用上的要求不严格性，造成了饲料的严重浪费，尤其是在目前以蛋白质为原料的饲料短缺和价格的不断上涨的情况下，严重的影响了肉鸡养殖的经济效益。饲用微生物制剂做为一种新型的饲料添加剂，不但可以促进动物的生长，提高饲料的转化率同时还具有增强动物机体自身免疫器官功能的作用。其中芽孢杆菌做为一类新型的益生菌微生物制剂不但具有调控动物体内消化道内菌群的平衡和以上功能外，而且还具有抗逆性强、耐高温、耐高压，具有很强的产蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶等活性，能够降解以植物为来源的大分子物质，如纤维素、淀粉和蛋白质等，以及饲料中的某些抗营养因子等独特的生物学特征，以此来促进动物对营养物质的消化和吸收，从而可以达到提高饲料转化率的目的。本试验从28日龄健康鸡空肠粘膜中分离得到具有产芽孢能力的且分别具有较强产蛋白质酶的P-98菌株、产纤维素酶的C-8菌株、产淀粉酶的S-4菌株，并对三菌株进行了菌落、菌体以及芽孢形态观察，生理生化鉴定和构建16S rDNA系统发育树，最后鉴定P-98菌株为Bacillus methylotrophicus；C-8菌株为Bacillus methylotrophicus；S-4菌株为Bacillus velezensis。为后期进行产酶菌剂的肉鸡饲喂试验，本试验对产酶芽孢杆菌生物学特性进行体外评价研究，结果显示所筛选的三株菌均具有较快的生长性能、良好的产酶和抑制治病菌能力；具有良好的低pH值、胆盐、高温耐受性；并且经过小白鼠和雏鸡灌胃试验表现了良好的安全性。为了菌剂的后期生产对三株菌株进行了产芽孢条件优化，通过单因素试验和正交试验结果显示，S-4菌株最适的产芽孢发酵条件为：玉米粉2.0%，玉米浆1.5%，NaCl0.2%，K₂HPO₄0.4%，KH₂PO₄0.1%，初始pH7.0，250mL三角瓶装液量50mL，接种量6%，摇瓶转速180r/min，培养时间为48小时，发酵温度37℃；P-98菌株的产芽孢最佳发酵条件为：淀粉0.5%，酵母粉0.5%，MnSO₄·H₂O0.1%，K₂HPO₄0.4%，KH₂PO₄0.1%，初始pH7.0，250mL三角瓶装液量50mL，接种量6%，摇瓶转速180r/min，培养时间为48小时，发酵温度37℃；C-8菌株株的产芽孢最佳发酵条件为：玉米粉2.0%，大豆蛋白胨2.0%，MgSO₄·7H₂O0.05%，CaCl₂0.02%，Na₂HPO₄0.2%，NaH₂PO₄0.1%，初始pH7.0，250mL三角瓶装液量50mL，接种量6%，摇瓶转速180r/min，培养时间为48小时，发酵温度37℃。P-98、C-8、S-4菌株发酵液的芽孢产率分别达到87.60%、95.20%、95.60%。为菌株的芽孢菌剂的生产与应用奠定了基础。通过菌株发酵条件优化结果生产三株菌株菌剂，并进行为期42天的肉鸡饲喂试验，在饲喂期间采用国标法对粪样中大肠杆菌、乳酸菌、双歧杆菌进行计数，测定十二指肠中蛋白酶、纤维素酶，淀粉酶，脂肪酶活力的变化，并计算粪样中各有机成分及磷和钙的百分含量。饲喂芽孢杆菌后，与对照组相比各试验组十二指肠内消化酶活性都有了显著的提高。并且各类营养物质在粪便中的残留也随着减少，说明芽孢杆菌所产消化酶确实促进了饲料中的营养物质的分解，促进了肉鸡的吸收。随着芽孢杆菌使用时间不断增长，各处理肠道中的菌群数与对照组相比，大肠杆菌有下降的趋势，乳酸杆菌和双歧杆菌均有升高的趋势，器官免疫指数有升高的趋势。由此说明了芽孢杆菌制剂可以有效的调节肠道内微生态的平衡，有效地抑制肠道中的大肠杆菌等有害菌群的生长和繁殖，提高了乳酸菌等有益菌的浓度，改善了肠道内的环境，并增强了动物机体自身的免疫器官指数。综合肉鸡喂养试验结果表明，三株菌株的肉鸡饲喂试验达到了良好的效果，三种芽孢杆菌制剂均具有增强机体自身免疫器官指数，提高饲料的转化率、改善肉鸡生长性能并降低料肉比等作用。并为通过提高饲料利用率，来为降低肉鸡的生产成本，提高养殖的经济效益提供了科学的理论依据。为益生菌的微生物饲料添加剂的制备和生产提供了新的试验菌株。

鸡源产酶芽孢杆菌菌株的筛选鉴定及饲喂效果研究

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