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紫荆黄萎病病原学研究

作　者: 陆文静
导　师: 杨家荣; 胡小平
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 植物病理学
关键词: 紫荆黄萎病致病性大丽轮枝菌寄主范围生物学特性
分类号: S436.8
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

紫荆（Cercis chinensis Bunge）原产于我国，是豆科（Fabaceae）紫荆属（Cercis.L）落叶灌木或小乔木，分布于陕、豫、甘、冀、鄂等省。紫荆广泛用于公园、城市道路的绿化；其树皮、木材及根均可入药，具有重要医药价值。紫荆黄萎病在陕西、河南等地均有发生，常造成植株大面积死亡，大大降低了其观赏价值及经济价值。本文开展紫荆黄萎病病原学的相关研究，取得以下主要结果：1.紫荆黄萎病的发病症状表现为：发病初期，植株叶片从边缘开始萎蔫，逐渐向内部扩展，叶片萎蔫分为两种类型：一种为黄色干枯型；另一种为灰绿色干枯型。发病后期，两种类型的坏死病叶均保持在枝条上不脱落；剥开发病枝条表皮可见褐色病残线；用刀片横切发病植株茎部和叶柄，肉眼可见木质部、韧皮部和髓部有褐色病变。发病株的个别枝条或树木的一侧发病严重。2.采用常规组织分离法从发病紫荆中分离纯化获得6个菌株（编号为CC001~CC006），依据Koch’s准则证明代表菌株CC001（各菌株在菌落形态上无明显差异）为该病害病原菌。结合形态学特征和rDNA-ITS序列分析确定引起紫荆黄萎病发生的病原菌CC001为大丽轮枝菌（Verticillium dahliae Kleb.）3.本试验选用了茄科、豆科、十字花科、锦葵科等9科17种常见栽培植物和杂草对病原菌CC001进行寄主范围测定，结果显示：该菌株只侵染马铃薯和棉花，说明该菌具有一定的寄主专化性。4.生物学特性测定表明：最适病原菌CC001生长的培养基是马铃薯蔗糖培养基（PSA），最适其产孢的培养基是梅干培养基（PCA）；该菌在pH为4.5~11范围内均能生长，最适菌丝生长pH为7，最适产孢pH为5；病原菌菌丝生长和产孢的最适碳源分别是果糖和淀粉；不同氮源对CC001生长和产孢的影响表明铵态氮较硝态氮好。目前，国内外未见对紫荆黄萎病病原菌的相关报道。本文的相关研究为进一步揭示该病害的发生发展规律和制定综合防治措施奠定基础，具有重要的理论意义和实践价值。

全文目录

摘要  6-7
ABSTRACT  7-12
第一章文献综述  12-19
  1.1 紫荆概述  12
  1.2 紫荆的地理分布  12
  1.3 紫荆的重要性  12-13
  1.4 紫荆病害及国内外研究现状  13-14
  1.5 轮枝菌属（Verticillium spp.）真菌研究进展  14-15
  1.6 真菌 rDNA-ITS 序列分析在真菌分类鉴定中的应用  15-16
  1.7 林木对 Verticillium spp.的抗感病种类  16-18
  1.8 研究的目的意义及技术路线  18-19
    1.8.1 研究意义  18
    1.8.2 本研究技术路线  18-19
第二章紫荆黄萎病病原的病害调查及症状描述  19-24
  2.1 材料  19
    2.1.1 调查地点  19
    2.1.2 用品与仪器  19
  2.2 试验方法  19-21
    2.2.1 样品采集  19
    2.2.2 田间病害调查  19
    2.2.3 发病症状观察  19-20
    2.2.4 制作发病组织切片  20
    2.2.5 显微镜观察  20
    2.2.6 解剖镜观察  20-21
  2.3 结果与分析  21-24
    2.3.1 田间调查结果  21
    2.3.2 病害症状特点  21-22
    2.3.3 病害组织切片特点  22-24
第三章病原菌分离和致病性测定  24-30
  3.1 材料  24
    3.1.1 分离样品  24
    3.1.2 接种材料  24
    3.1.3 接种菌株  24
    3.1.4 试剂与仪器  24
  3.2 试验方法  24-26
    3.2.1 病原菌分离  24-25
    3.2.2 病原菌的单孢纯化  25
    3.2.3 分生孢子悬浮液制备  25
    3.2.4 病原菌菌种的保藏  25
    3.2.5 致病性测定  25-26
  3.3 结果与分析  26-30
    3.3.1 病原菌分离  26-27
    3.3.2 致病性测定  27-28
    3.3.3 离体接种测定结果  28-30
第四章紫荆黄萎病病原鉴定  30-35
  4.1 材料  30
    4.1.1 鉴定菌株  30
    4.1.2 用品与仪器  30
  4.2 试验方法  30-32
    4.2.1 病原菌的形态学鉴定  30-31
    4.2.2 病原菌的分子生物学鉴定  31
    4.2.3 菌株 rDNA-ITS 区扩增和测序  31-32
    4.2.4 序列比对及系统发育树构建  32
  4.3 结果与分析  32-35
    4.3.1 病原物分离及形态特征鉴定  32-33
    4.3.4 序列比对及系统发育树构建  33-35
第五章病原菌生物学特性测定和寄主范围测定  35-42
  5.1 试验材料  35-36
    5.1.1 供试菌株  35
    5.1.2 不同培养基对 CC001 菌落生长及产孢量的影响  35
    5.1.3 不同 pH 对 CC001 菌落生长及产孢量的影响  35
    5.1.4 不同 C 源对 CC001 菌落生长及产孢量的影响  35
    5.1.5 不同 N 源对 CC001 菌落生长及产孢量的影响  35
    5.1.6 寄主范围测定的供试植物  35
    5.1.7 仪器与试剂  35-36
  5.2 试验方法  36-37
    5.2.1 培养基制作  36
    5.2.2 生物学特性测定  36-37
    5.2.3 寄主范围测定  37
  5.3 结果与分析  37-42
    5.3.1 CC001 菌株生物学特性测定结果  37-40
    5.3.2 CC001 寄主范围测定  40-42
第六章结论与讨论  42-44
参考文献  44-47
致谢  47-48
作者简介  48

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