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核桃茎点霉黑斑病病原学及防治技术研究

作　者: 熊婉
导　师: 黄俊斌
学　校: 华中农业大学
专　业: 植物病理学
关键词: 核桃茎点霉黑斑病 Phoma herbicola 病原分离鉴定生物学特性抗病性
分类号: S436.64
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

近年来,在湖北宜昌核桃种植过程中,发生了一种新病害：核桃茎点霉黑斑病,此病害对核桃的质量和产量产生了影响,进而使核桃种植的经济效益降低。本文对病原进行了分离和鉴定,研究了致病菌的生物学特性、不同核桃品种的抗病性,并以病原学方面的研究为基础,开展了药剂抑制菌丝生长和孢子萌发的试验及室内防病试验,为深入了解该病的发生规律、制定防病措施提供了理论依据。本研究得到以下结果：在湖北宜昌的核桃田块进行病害调查,采集症状典型的病叶和病枝,采用常规组织分离法得到分离菌株Phol,将菌株Pho1的菌丝块和分生孢子悬浮液分别接种于健康的核桃叶片上,叶片的发病率均为100%。根据致病菌株在不同培养基上的菌落大小、特征,分生孢子器和分生孢子的形态大小等特征描述,参照Phoma鉴定手册,将Phol菌株鉴定为Phoma herbicola。在Genbank核酸数据库中对Pho1菌株的rDNA-ITS序列进行比对,发现它与登陆号为FJ827141.1的Phoma sp.BJ-CH-2008菌株序列能够比对上的碱基数目最多,具有最高的同源性,为98%,E-value值为最小值0。构建系统发育树,结果显示Pho1菌株的ITS序列与几种茎点霉属真菌具有最近的遗传距离,且聚为一类。对核桃茎点霉黑斑病病原菌菌株Phol进行生物学特性研究,结果表明,在生长过程中,该菌株对pH适应能力较强,培养基的pH值为4-11时均能生长,最适生长pH值为5；对温度的适应能力较强,培养环境温度为5-35℃时均可生长,最适生长温度为25℃；在碳、氮源的利用方面,菌株Pho1分别对乳糖和KN03的利用效果最好,对淀粉和NH4Cl的利用效果最差。采用离体叶片接种法,研究了核桃茎点霉黑斑病菌的不同核桃品种的室内抗病性。供试的8个核桃品种中,香玲、礼品2号、鲁核为中抗品种；辽核2号、神农架野核桃为感病品种；礼品3号、辽核1号、礼品1号为高感品种。选用8种杀菌剂进行室内毒力测定,结果表明,5%井冈霉素A可溶粉剂对病原菌菌丝生长的抑制作用最好,EC50为0.5825μg/ml,70%甲基硫菌灵可湿性粉剂对病原菌孢子萌发的抑制作用最好,ECs0为0.0282μg/ml。选用5%井冈霉素A可溶粉剂和70%甲基硫菌灵可湿性粉剂用于室内防病试验,采用离体叶片接种法,结果显示,70%甲基硫菌灵可湿性粉剂防治效果高于5%井冈霉素A可溶粉剂；采用先施药再接菌的施药方法,防治效果高于先接菌再施药。

全文目录

摘要  6-8
Abstract  8-10
第一章文献综述  10-20
  1 核桃概述  10
  2 核桃病害  10-14
    2.1 核桃枝枯病  11-12
    2.2 核桃黑斑病  12
    2.3 核桃炭疽病  12-13
    2.4 核桃腐烂病  13-14
  3 茎点霉属的病原学研究进展  14-20
    3.1 茎点霉属的分类  14-15
    3.2 茎点霉属分类工作中分子生物学技术的应用  15-18
      3.2.1 随机扩增DNA多态性  15-17
      3.2.2 rDNA-ITS序列分析  17-18
      3.2.3 可溶性蛋白和同工酶电泳技术  18
    3.3 茎点霉属真菌的生物学特性研究  18-20
第二章核桃茎点霉黑斑病病原鉴定  20-33
  1 材料与方法  20-23
    1.1 核桃茎点霉黑斑病田间调查及病叶的采集  20
    1.2 菌株的分离培养与纯化  20
      1.2.1 菌株的分离  20
      1.2.2 分离菌株的单孢纯化  20
    1.3 致病性测定  20-21
      1.3.1 菌丝块接种  21
      1.3.2 分生孢子悬浮液接种  21
      1.3.3 病原菌的再分离  21
    1.4 病原菌的形态学鉴定  21-22
      1.4.1 菌落形态、分生孢子器、分生孢子观察  21
      1.4.2 形态学鉴定依据  21-22
    1.5 NaOH颜色反应  22
    1.6 rDNA-ITS分子鉴定  22-23
      1.6.1 菌丝体的培养、收集  22
      1.6.2 DNA提取  22-23
      1.6.3 扩增引物  23
      1.6.4 PCR反应体系与反应条件  23
      1.6.5 GenBank序列分析  23
      1.6.6 系统发育树的构建  23
  2 结果与分析  23-31
    2.1 田间调查及病样采集  23-24
    2.2 菌株的分离培养与纯化  24-25
    2.3 致病性测定  25-26
      2.3.1 菌丝块接种  25-26
      2.3.2 孢子液接种  26
    2.4 病原菌的形态学观察  26-28
    2.5 NaOH反应  28
    2.6 鉴定依据及结果  28-29
    2.7 rDNA-ITS序列分析  29-31
  3 结论与讨论  31-33
第三章核桃茎点霉黑斑病菌的生物学特性研究  33-39
  1 材料与方法  33-34
    1.1 温度对菌丝生长的影响  33
    1.2 pH值对菌丝生长的影响  33
    1.3 光照对菌丝生长的影响  33
    1.4 不同碳源对菌丝生长的影响  33
    1.5 不同氮源对菌丝生长的影响  33-34
    1.6 数据统计与分析  34
  2 结果与分析  34-37
    2.1 温度对菌丝生长的影响  34
    2.2 pH值对菌丝生长的影响  34-35
    2.3 光照对菌丝生长的影响  35
    2.4 不同碳源对菌丝生长的影响  35-36
    2.5 不同氮源对菌丝生长的影响  36-37
  3 结论与讨论  37-39
第四章品种抗性评价及室内防病试验  39-50
  1 材料与方法  39-42
    1.1 供试菌株  39
    1.2 不同核桃品种的室内抗性评价  39
    1.3 不同杀菌剂的室内毒力测定  39-41
      1.3.1 供试药剂及浓度  39-40
      1.3.2 菌丝生长速率法  40
      1.3.3 抑制孢子萌发法  40-41
    1.4 不同杀菌剂的室内防治效果  41-42
    1.5 数据统计及分析  42
  2 结果与分析  42-49
    2.1 不同核桃品种的室内抗性评价  42-44
    2.2 不同杀菌剂的室内毒力测定  44-48
      2.2.1 菌丝生长速率法  44-46
      2.2.2 抑制孢子萌发法  46-48
    2.3 不同杀菌剂的室内防治效果  48-49
  3 结论与讨论  49-50
第五章总结与展望  50-51
  1 总结  50
  2 展望  50-51
参考文献  51-56
致谢  56

核桃茎点霉黑斑病病原学及防治技术研究

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