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泰山白首乌新品种生物学特性研究及其主要活性成分的含量测定

作　者: 侯彩婷
导　师: 徐凌川
学　校: 山东中医药大学
专　业: 生药学
关键词: 泰白1号生物学特性白首乌二苯酮白首乌乙素 ITS序列
分类号: R284.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

泰山白首乌，又名白首乌、和尚乌、泰山何首乌，萝藦科鹅绒藤属戟叶牛皮消（Cynanchum bungei Decne.）的干燥块根，为中国特有补益中药。戟叶牛皮消，为多年生草本植物，广泛分布于我国山东、河北、甘肃一带，尤以山东泰安一带最为有名。作为我国特有滋补中药，市面上流通使用的泰山白首乌主要为药材饮片，有关泰山白首乌其他剂型的中药和保健品还有待开发。目前，泰山白首乌药源主要靠野生，由于生长周期长、产量低、过量采挖等因素，野生资源急剧减少，市场上大量流通使用的白首乌主要为同属异种的耳叶牛皮消的块根，二者化学成分有所差异，不能混淆。泰山白首乌药材的缺乏严重影响了其正常的临床用药需求，也严重影响泰山白首乌药材的开发利用。为开发泰山白首乌野生资源，解决人工种植关键技术和产量不足问题，对经过引种驯化后的泰山白首乌野生种进行系统选育，选育出一种优质高产的泰山白首乌品种，命名为“泰白1号”。本研究对泰白1号的生物学特性进行观察与研究，并结合泰白1号的药材性状和品质以及分子生物学方面的特征，以期为泰白1号的推广种植提供依据。研究结果如下：1．泰白1号的生物学特性目的：保证泰山白首乌新品种的品种特性、药材产量和质量以及为其实现现代化农业生产提供依据。方法：以通风良好的阔地作试验地，于4月上旬播种，出苗后及时疏苗、定苗，保证良好的田间管理，并通过观察比较泰山白首乌新品种与传统泰山白首乌的种子、植物学特征、生长发育规律以及产量等生物学特性。结果与结论：泰白1号的果实较传统泰山白首乌表现出个大、籽粒饱满的优势；泰白1号的种子较传统泰山首乌表现出粒大、饱满的优势；泰白1号植株生长整齐一致，叶色浓绿，根形好、毛根少、分枝能力强，单块根质量高，群体的整齐度高，综合性状明显优于传统泰山白首乌。2．不同品种泰山白首乌中主要活性成分的含量测定目的：测定不同品种泰山白首乌中白首乌二苯酮和白首乌乙素的含量，为评定泰山白首乌药材品质提供依据。方法：采用高效液相法，用C18柱，乙腈：水（30:70）作流动相，以0.8mL/min的流速，检测波长为280nm，进样量为10μL。泰山白首乌药材以甲醇超声提取两次，每次30min，离心所得上清液用0.22μm微孔滤膜过滤后备用。结果与结论：白首乌二苯酮和白首乌乙素在0.1~200μg/mL范围内线性关系均表现良好，相关系数分别为0.9992、0.9984；样品中白首乌二苯酮和白首乌乙素的含量在48小时内均稳定；重复进样得白首乌二苯酮的RSD为5.09%，白首乌乙素的RSD为2.96%；两种主要活性物质的加样回收率维持在94.79%~101.12%范围内，RSD不高于8%。该方法各项指标符合仪器分析要求。泰白1号药材中白首乌二苯酮和白首乌乙素的含量分别为0.755、0.017mg/g，其含量明显高于传统泰山白首乌。3．不同品种的泰山白首乌的ITS序列和psbA-trnH序列分析目的：明确泰白1号较其他栽培种和野生种的ITS序列和psbA-trnH序列的差异，并为中药DNA条形码以及泰山白首乌分子生药学特征的研究提供参考。方法：采用两对引物PsbAf-trnHr、ITS1-ITS4分别扩增不同样品DNA，扩增产物经纯化后克隆、测序，再利用MEGA5、DNAMAN等软件分析其ITS序列和psbA-trnH序列的变异特征。结果与结论：泰山白首乌不同品种的psbA-trnH序列均相同。泰山白首乌不同品种的ITS序列存在着一定的差异。来自于泰白1号种植基地的5个样品，较野生种以及传统泰山首乌形成独立的分支，表明来自于泰白1号种植基地的5个样品，较野生种发生了一定的变异，泰白1号品种具备遗传稳定性。所得的泰山白首乌的ITS序列和psbA-trnH序列丰富了基因库，为泰山白首乌以及泰白1号的分子鉴定奠定基础。

全文目录

摘要  3-5
Abstract  5-10
引言  10-12
第一章文献综述  12-32
  第一节白首乌药源研究  12-16
    1 本草考证  12-14
    2 植物基源调查  14-16
    3 资源调查  16
  第二节药材性状及显微研究  16-19
    1 药材性状特征  16-17
    2 药材显微特征  17-19
  第三节化学成分和药理研究  19-25
    1 泰山白首乌的化学成分研究  19-22
    2 耳叶牛皮消的化学成分研究  22-23
    3 隔山消的化学成分研究  23
    4 三种白首乌的药理毒理作用研究  23-25
  第四节栽培现状研究  25-28
    1 栽培品种的研究  25-26
    2 繁育方式的研究  26-27
    3 生产管理研究  27-28
  第五节种质资源的鉴定方法研究  28-32
    1 中药材 DNA 条形码片段的选择  29-30
    2 中药材 DNA 条形码技术的优势  30
    3 中药材 DNA 条形码技术的问题与展望  30-32
第二章泰山白首乌新品种生物学特性研究  32-45
  第一节泰山白首乌新品种种子生物学特性  33-39
    1 试验材料  33
    2 试验方法  33-34
    3 结果与分析  34-38
    4 讨论  38-39
  第二节泰山白首乌新品种植株的生物学特性  39-45
    1 材料与方法  39-40
    2 结果与分析  40-43
    3 讨论  43-45
第三章泰山白首乌新品种中主要活性成分的含量测定  45-54
  第一节白首乌二苯酮和白首乌乙素标准品的制备  46-49
    1 材料与仪器  46
    2 试验方法  46-48
    3 结果与分析  48
    4 讨论  48-49
  第二节白首乌二苯酮和白首乌乙素的含量的测定  49-54
    1 材料与仪器  49
    2 试验方法  49-50
    3 结果与分析  50-52
    4 讨论  52-54
第四章不同泰山白首乌品种的 trnH-psbA 和 ITS 序列分析  54-68
  1 材料与仪器  54-55
  2 试验方法  55-58
  3 结果与分析  58-66
  4 讨论  66-68
结语  68-70
参考文献  70-74
附录  74-81
致谢  81-83
攻读学位期间发表论文  83-89
详细摘要  89-93

泰山白首乌新品种生物学特性研究及其主要活性成分的含量测定

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