学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

柑橘黑斑病、褐斑病的分离鉴定及分子检测

作　者: 唐淬
导　师: 周常勇; 周彦
学　校: 西南大学
专　业: 植物病理学
关键词: 柑橘黑斑病 柑橘褐斑病 分离鉴定 分子检测 序列分析
分类号: S436.66
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
下　载: 182次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


柑橘是世界上最重要的果树种类之一,其产量位居水果之首,具有重要的经济地位。分别由柑橘球座菌(Guignardia citricarpa Kiely)和交链格孢菌[Alternaria alternata (Fr.) Keissle]引起的柑橘黑斑病和柑橘褐斑病是引起柑橘果实病变的重要病害,主要在柑橘果实上形成黑色或褐色病斑,严重时病斑布满整个果面,导致果实脱落,造成大量减产。本研究对从四川、广西、福建、重庆、巴西等地采集柑橘黑斑病和柑橘褐斑病疑似样品进行分离鉴定,并对获得的阳性样品进行序列分析,结果发现：1、从48个柑橘黑斑病疑似样品中分离得到14株柑橘黑斑病菌株。(1)根据菌落在PDA培养基上的形态特征,将分离得到的菌落归为四类。采用分生孢子悬浮液进行接种试验,只有琯溪蜜柚在接种两个月后表现出症状。对接种后的植株进行PCR检测,结果表明只有在琯溪蜜柚上检测出柑橘黑斑病菌的存在。(2)以核糖体DNA内转录间隔区(rDNA-ITS)为靶标采用真菌通用引物ITS1/ITS4进行PCR扩增,得到610 bp大小的片段,其灵敏度为0.1 ng。经BLAST比对后,与柑橘黑斑病的同源性达99%,由此明确分离得到的菌株为柑橘黑斑病菌。将获得的14株菌株的rDNA-ITS序列构建进化树,发现柑橘黑斑病菌的种内遗传多样性较为丰富(3)对柑橘上常见的真菌性病害柑橘脂点黄斑病、柑橘炭疽病、柑橘黑斑病的ITS序列进行多重同源性比较,设计了柑橘黑斑病的特异性引物RT-1/RT-2,其靶标带为210 bp。利用L9(34)正交法优化了PCR反应参数。用梯度PCR优化退火温度,明确最佳退火温度为54.7℃。该特异性引物RT-1/RT-2的灵敏度为0.1 pg。该检测体系为柑橘黑斑病的检测提供了一种快速、方便、灵敏的检测手段,为柑橘黑斑病的防控提供了基础。2、从8个柑橘褐斑病样品分离得到4株柑橘褐斑病菌株分离得到的病菌在PDA培养基上的菌落灰色,气生菌丝发达,分隔,多分枝。分生孢子梗单生或数根簇生,直立或顶端微弯曲,有分隔,但不分枝,色泽从基部到顶部由深褐色渐变淡褐色。采用引物PG2/PG3对病菌的多聚半乳糖醛酸酶基因序列进行扩增,得到481 bp的片段,经BLAST比对后,与引起柑橘褐斑病的交链格孢菌[A.alternata (Fr.) Keissle]同源性为99%,结合病菌在培养基上的形态判断引起柑橘褐斑病害的病原为交链格孢菌。

全文目录


摘要  7-9
Abstract  9-11
缩写词和英汉对照表  11-12
第一章 文献综述  12-24
  1.1 柑橘黑斑病  12-17
    1.1.1 病原  12-13
    1.1.2 寄主范围及分布  13
    1.1.3 症状  13-14
    1.1.4 发病规律  14
    1.1.5 检测方法  14-16
    1.1.6 病害防治  16-17
  1.2 柑橘褐斑病  17-24
    1.2.1 病原  17
    1.2.2 寄主范围及分布  17
    1.2.3 症状  17-18
    1.2.4 发病机理及规律  18-20
    1.2.5 检测方法  20-21
    1.2.6 病害防治  21-24
第二章 引言  24-26
第三章 柑橘黑斑病、褐斑病的分离与鉴定  26-44
  3.1 实验材料  26-27
    3.1.1 柑橘黑斑病、褐斑病样品  26
    3.1.2 主要实验仪器设备  26
    3.1.3 主要化学试剂及耗材  26-27
  3.2 试验方法  27-33
    3.2.1 培养基的配制  27
    3.2.2 常用试剂的配制  27-28
    3.2.3 柑橘黑斑病的分离鉴定  28
    3.2.4 柑橘黑斑病的形态学鉴定  28
    3.2.5 柑橘黑斑病的致病性测定  28
    3.2.6 柑橘黑斑病rDNA-ITS序列分析  28-31
    3.2.7 柑橘褐斑病菌的分离鉴定  31-32
    3.2.8 分子生物学鉴定  32-33
  3.3 结果与分析  33-44
    3.3.1 柑橘黑斑病的分离鉴定  33-39
    3.3.2 柑橘褐斑病的分离鉴定  39-44
第四章 柑橘黑斑病特异性引物的设计与检测  44-50
  4.1 实验材料  44
    4.1.1 主要实验仪器设备  44
    4.1.2 主要化学试剂及耗材  44
  4.2 试验方法  44-46
    4.2.1 特异性引物设计  44
    4.2.2 特异性引物PCR扩增条件的优化  44-45
    4.2.3 特异性引物的特异性检测  45
    4.2.4 采用特异引物检测接种发病样品  45
    4.2.5 特异性引物RT-1/RT-2与通用引物ITS1/ITS4的灵敏度检测  45-46
  4.3 结果与分析  46-50
    4.3.1 特异性引物序列的确定  46
    4.3.2 特异性引物PCR扩增条件的优化  46-47
    4.3.3 特异性引物的特异性检测  47-48
    4.3.4 采用特异引物检测接种发病样品  48-49
    4.3.5 特异性引物RT-1/RT-2与通用引物ITS1/ITS4的灵敏度检测  49-50
第五章 结论与讨论  50-56
  5.1 结论  50
  5.2 讨论  50-56
    5.2.1 柑橘黑斑病的分离鉴定  50-51
    5.2.2 柑橘黑斑病菌rDNA-ITS的序列分析  51-52
    5.2.3 特异性引物的设计  52-53
    5.2.4 特异性引物的灵敏度与特异性的检测  53
    5.2.5 柑橘褐斑病的分离鉴定  53-54
    5.2.6 柑橘褐斑病的分子生物学鉴定  54-56
参考文献  56-66
附录  66-74
致谢  74-76
攻读学位期间发表论文及参加科研项目  76

相似论文

  1. 南京地区西花蓟马Frankliniella occidentalis （Pergande）的发生调查及其线粒体基因组研究,S433
  2. 河南低致病性禽流感病毒（H9亚型）分离鉴定及生物学特性研究,S852.65
  3. 中国玉米南方锈菌的分子遗传多样性和超微结构研究,S435.131.4
  4. 多菌灵降解菌的分离鉴定、生物学特性及多菌灵水解酶基因的克隆和表达研究,X172
  5. 鸡源禽致病性大肠杆菌分离鉴定及其毒力相关基因分布特征分析,S852.61
  6. 鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定及S1、N基因的序列分析,S852.65
  7. 猪细小病毒河南流行株的分离、鉴定及部分生物学特性研究,S852.65
  8. 芝麻枯萎病病原菌分离、鉴定及种质抗枯萎病特性研究,S435.653
  9. 光合细菌的分离鉴定及胶状红长命菌分泌的蛋白水解酶生化性质的研究,Q93
  10. 抗重金属汞、铜、锌单抗可变区序列的克隆鉴定、真核表达及三维模拟,X171.5
  11. 鸡白痢沙门氏菌的分离鉴定及微量平板凝集抗原的制备,S858.31
  12. 仔猪腹泻大肠埃希菌的分离鉴定及部分特性研究,S858.28
  13. 油茶根化学成分研究,R284
  14. 荷叶生物碱单体的分离鉴定及其抑菌活性研究,R284.2
  15. 新疆酸驼乳中乳酸菌分离鉴定及其细菌素研究,TS201.3
  16. 豌豆肌动蛋白异型体（PEAc3）与绿色荧光蛋白（GFP）的融合表达与生化特性分析,Q946.1
  17. 阿特拉津降解菌生物学特性的研究，关键降解酶基因克隆及基因簇的构建,X172
  18. 巴西橡胶树HbPht1基因的克隆和磷胁迫下根部和叶片的SSH文库构建,S794.1
  19. 内蒙古地区草地螟白僵菌的生物学特性及遗传多样性研究,S476.12
  20. 猪链球菌2型的分离鉴定及PCR检测,S852.611
  21. 基于现代时间序列分析的动态数据处理方法研究,P228.4

中图分类: > 农业科学 > 植物保护 > 病虫害及其防治 > 园艺作物病虫害及其防治 > 果树病虫害 > 柑桔类病虫害
© 2012 www.xueweilunwen.com