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郁金炭疽病的研究

作　者: 冯阿芳
导　师: 严吉明
学　校: 四川农业大学
专　业: 植物病理学
关键词: 郁金炭疽病生物学特性侵染杀菌剂室内毒力测定
分类号: S435.672
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

郁金为姜科姜黄属(Curcuma)植物温郁金Curcuma wenyujin Y. H, Chen et C. Ling、姜黄C. longa L.、广西莪术C. kwangsiensis S. G. Lee et C. F. Liang或蓬莪术C. phaeocaulis Val的干燥块根,具有悠久的药用历史。郁金炭疽病在主产区是普遍发生的一种病害,病原为Colletotrichum capsici (sfd.)。本试验对病原菌的分离与鉴定、生物学特性、病害侵染和室内药剂毒力测定进行了研究。研究结果如下：1.郁金炭疽病害的症状特点及病原菌的种类鉴定症状特点：病害初期,叶片生淡褐色圆形小斑,之后扩大为圆形、近圆形大小不等的病斑,边缘深褐色,具环纹线,内为枯白色,有的病斑外环绕褪绿晕圈。病斑多时相互愈合为不规则大斑。潮湿时病斑二面生褐色或黑色小点,为病菌的分生孢子盘。病原菌鉴定：病原菌分生孢子盘黑色堆状突起,单生至丛生,圆形或近圆形；刚毛黑色或黑褐色,分隔,从基部至顶端渐细：分生孢子单孢,无色,镰刀形,大小为21.11～24.91μm×2.31-4.34μm,分生孢子产生在分生孢子盘中;附着胞深褐色,近圆形或不规则形。对病原菌进行rDNA-ITS序列分析,发现被测菌株与Colletotrichum capsici (登录号为HQ271467)菌构成一支,同源性高达99%。综合形态学和分子生物学鉴定结果,将病原菌鉴定为辣椒炭疽菌(Colletotrichum capsici (sfd.))。2.郁金炭疽病菌的生物学特性研究病原菌在10～35℃均能生长,最适温度为25℃；产孢的温度范围为20～35℃,最适温度为30℃。在20%郁金组织煎汁+PDA培养基上生长最好,马铃薯胡萝卜培养基次之,最差的是玉米粉琼脂培养基。C. capsici产孢量以20%郁金组织煎汁+PDA培养基最好。在pH4～10范围内菌丝均能生长和产孢,最适菌丝生长pH值为6～7,产孢最适pH为6。菌丝生长的碳源利用以葡萄糖为最好,其次为麦芽糖和蔗糖；氮源利用以蛋白胨最佳,氯化铵和硫酸铵最差。光照对产孢无显著影响,但光暗交替有利于菌丝生长。病原菌分生孢子在7种供试萌发液中均可以萌发,在郁金汁液中萌发率接近100%；分生孢子萌发对湿度的要求较高,RH(相对湿度)<95%时,分生孢子不萌发,而当RH≥95%时,孢子萌发率随RH增大而上升,在水滴中萌发率达到最大,约为97.5%；分生孢子在2.5h以后开始萌发,大约8h以后萌发率达到最大；分生孢子萌发的温度范围是15～35℃,以30℃为最适,萌发率达到96.11%,温度过高或者过低都不利于孢子萌发；光照对于孢子的萌发没有影响;病原菌分生孢子的致死温度为54℃10min。3.病原菌的侵染在郁金叶片针刺接种4h后,郁金炭疽病菌分生孢子开始萌发,从孢子的中央或顶端伸出芽管,芽管伸长后顶端膨大形成深褐色的附着胞,附着胞上再产生侵入丝。接种后24h,观察到多数菌丝形成分枝,侵入丝和部分菌丝开始侵入组织。侵入的方式主要有三种,①气孔侵入,②细胞间侵入,③直接侵入。4.郁金炭疽病菌的室内药剂毒力测定采用生长速率法测定了多菌灵、咪鲜胺、三唑酮、苯醚甲环唑、百菌清5种杀菌剂对郁金炭疽病菌菌丝生长的抑制作用。结果表明：5种杀菌剂对菌丝生长均有抑制作用,多菌灵和咪鲜胺的抑制作用最强,苯醚甲环唑次之,三唑酮的抑菌效果最差。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-11
文献综述  11-21
  1 郁金简介  11
  2 郁金的价值及其应用  11-12
  3 炭疽真菌的分类地位  12-13
  4 rDNA ITS序列及其在炭疽属分类中的应用  13-14
  5 炭疽病菌的生物学性状研究进展  14-16
  6 植物病害侵染  16-17
  7 炭疽病的防治  17-21
    7.1 农业防治  17-18
    7.2 化学防治  18-21
材料与方法  21-27
  1 郁金炭疽病的症状  21
  2 病原菌的分离与鉴定  21-23
    2.1 病原菌的分离  21
    2.2 病原菌形态鉴定  21
    2.3 致病性鉴定  21-22
    2.4 ITS序列鉴定  22-23
      2.4.1 引物  22
      2.4.2 菌丝体培养  22
      2.4.3 DNA提取  22
      2.4.4 PCR扩增和序列测定  22-23
  3 郁金炭疽病菌的生物学特性研究  23-25
    3.1 不同培养条件对菌丝生长和孢子形成的影响  23-24
      3.1.1 培养基种类对菌丝生长和孢子形成的影响  23
      3.1.2 温度对菌丝生长和孢子形成的影响  23
      3.1.3 pH对菌丝生长和孢子形成的影响  23
      3.1.4 光照对菌丝生长和孢子形成的影响  23-24
      3.1.5 碳源对菌丝生长和孢子形成的影响  24
      3.1.6 氮源对菌丝生长和孢子形成的影响  24
    3.2 培养条件对分生孢子萌发的影响  24-25
      3.2.1 温度对分生孢子萌发的影响  24
      3.2.2 湿度对分生孢子萌发的影响  24
      3.2.3 光照对分生孢子萌发的影响  24
      3.2.4 营养液对分生孢子萌发的影响  24-25
      3.2.5 时间试验  25
      3.2.6 pH值对分生孢子萌发影响  25
    3.3 孢子致死温度的测定  25
    3.4 玻片上分生孢子存活力的测定  25
  4 侵入途径和侵染结构的观察  25-26
    4.1 接种  25
    4.2 光镜样品的制备与观察  25-26
  5 室内药剂的筛选  26-27
    5.1 供试杀菌剂  26
    5.2 杀菌剂对病原菌菌丝生长的影响  26-27
结果与分析  27-41
  1 郁金炭疽病的症状  27
  2 病原菌的分离鉴定  27-30
    2.1 病原菌的致病性鉴定  27
    2.2 病原菌的培养特征  27-28
    2.3 病原菌的形态特征  28-29
    2.4 病原菌的分子生物学鉴定  29-30
  3 郁金炭疽病菌的生物学特性研究  30-38
    3.1 不同培养条件对菌丝生长和产孢量的影响  30-34
      3.1.1 培养基种类与菌丝生长和产孢量的关系  30-31
      3.1.2 温度与菌丝生长和产孢量的关系  31
      3.1.3 pH与菌丝生长和产孢量的关系  31-32
      3.1.4 光照对菌丝生长和产孢量的影响  32
      3.1.5 碳源与菌丝生长和产孢量的关系  32-33
      3.1.6 氮源与菌丝生长和产孢量的关系  33-34
    3.2 影响分生孢子萌发因素的测定  34-37
      3.2.1 营养条件与分生孢子萌发的关系  34
      3.2.2 温度对分生孢子萌发的影响  34-36
      3.2.3 光照对分生孢子萌发的影响  36
      3.2.4 湿度与分生孢子萌发的关系  36-37
      3.2.5 酸碱度与分生孢子萌发的关系  37
    3.3 分生孢子的致死温度  37
    3.4 玻片上分生孢子存活力的测定  37-38
  4 侵染结构和侵入途径的研究  38-39
  5 室内药剂对菌丝生长的抑制作用  39-41
结论与讨论  41-45
  1 郁金炭疽病菌的鉴定  41-42
  2 郁金炭疽菌的生物学特性研究  42-43
  3 病原菌侵染寄主植物的观察  43-44
  4 室内药剂测定  44-45
参考文献  45-50
附录  50-51
致谢  51

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