学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

青蒿紫穗槐二烯合酶N-末端和Glycine-439在其功能中的作用

作　者: 王波
导　师: 李振秋
学　校: 河北大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 萜类合酶青蒿紫穗槐二烯合酶 N-末端截短定点突变功能鉴定
分类号: Q946
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
下　载: 1次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

萜类化合物是自然界中数量众多结构多样的天然化合物组之一,迄今为止,人们已经从自然界中发现了55,000多种。对萜类化合物的深入研究不仅在理论方面能够使我们更加深入的了解生物进化过程中次生代谢物在种群、群落形成过程中的作用,而且在应用方面对开发新的药物也具有重要意义。对萜类化合物的研究中最令人感兴趣的问题是生物是如何产生出数量如此众多的萜类化合物。萜类环化酶催化机理特别是催化特异性的揭示是解决萜类化合物多样性的首要问题。本实验以青蒿紫穗槐二烯合酶(ADS)为研究对象,结合生物信息学和分子生物学,通过对ADS N-末端的截短和Glycine-439的系列突变来初步探讨二者在ADS功能中的作用。对ADS N-末端截短20个氨基酸后,其失去了催化活性,而对其中的两个保守氨基酸Arginine-10和Tryptophan-20突变以后,并没有改变其催化产物。所以我们推测,ADSN-末端对酶活性的保持有重要的作用,它可能是作为一个整体来起作用,而单个保守氨基酸的突变并不改变其催化产物。对ADS Glycine-439的4个突变(G439A、S、C、V)功能分析发现,G439所处的位置的空腔较小的变化(G439A和G439S)能够使其保持活性,但是对催化产物的比例有一定的影响,而更大的变化则使其活性大大降低(G439C)甚至完全丧失(G439V)。以上的这些发现,为进一步研究萜类合酶的催化特异性以及实现通过合理设计来改变萜类合酶催化特异性而产生新结构化合物提供新的实验依据。

全文目录

摘要  5-6
Abstract  6-9
第1章绪论  9-15
  1.1 萜类合酶研究进展  9-13
    1.1.1 萜类化合物简介  9
    1.1.2 萜类合酶简介  9-10
    1.1.3 萜类合酶的催化机制  10-11
    1.1.4 萜类合酶的研究进展  11-13
  1.2 青蒿紫穗槐二烯合酶研究进展  13-15
    1.2.1 紫穗槐二烯合酶基因的克隆  13-14
    1.2.2 紫穗槐二烯合酶的特性  14
    1.2.3 紫穗槐二烯合酶的催化机制  14-15
第2章实验材料、试剂和技术  15-24
  2.1 菌种和质粒  15
  2.2 试剂与仪器  15-18
    2.2.1 主要试剂  15-17
    2.2.2 主要实验仪器  17-18
  2.3 实验技术  18-24
    2.3.1 大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl法)  18-19
    2.3.2 质粒DNA的转化  19
    2.3.3 质粒的提取  19-20
    2.3.4 PCR反应  20
    2.3.5 DNA的酶切和连接反应  20-21
    2.3.6 限制性内切酶酶切片段或PCR扩增片段的回收(回收试剂盒)  21
    2.3.7 蛋白质的纯化反应  21-22
    2.3.8 蛋白质的体外催化反应和GC MS分析  22
    2.3.9 快速定点突变  22-24
第3章青蒿紫穗槐二烯合酶N-末端截短和保守氨基酸突变  24-36
  3.1 青蒿紫穗槐二烯合酶N末端截短  24-30
    3.1.1 材料和试剂  24
    3.1.2 方法  24-26
    3.1.3 结果  26-30
  3.2 ADS N末端保守氨基酸的定点突变  30-34
    3.2.1 材料和试剂  31
    3.2.2 方法  31-32
    3.2.3 结果  32-34
  3.3 讨论  34-36
第4章青蒿紫穗槐二烯合酶Glycine-439点突变  36-42
  4.1 实验材料与方法  36-37
    4.1.1 材料和试剂  36
    4.1.2 方法  36-37
  4.2 结果  37-40
    4.2.1 突变质粒的测序验证  37-38
    4.2.2 突变质粒表达产物的电泳检测  38
    4.2.3 突变体的功能鉴定  38-40
  4.3 讨论  40-42
结语  42-43
参考文献  43-49
致谢  49

青蒿紫穗槐二烯合酶N-末端和Glycine-439在其功能中的作用

内容摘要

全文目录

相似论文