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腺病毒介导的小鼠肝脏鞘磷脂合酶SMS过表达与动脉粥样硬化发生关系的研究

作　者: 董继斌
导　师: 吴满平
学　校: 复旦大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 鞘磷脂(SM) 鞘磷脂合酶(SMS) 鞘磷脂水解酶(SMase) 动脉粥样硬化(AS) 高密度脂蛋白(HDL) 载脂蛋白(Apo) 动脉粥样硬化斑块主动脉腺病毒载体 RT-PCR 薄层层析(TLC) FPLC western-blotting SR-BI 凝胶扫描图像分析
分类号: R543
类　型: 博士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

本实验以鞘磷脂合酶(Sphingomyelin Synthase,SMS)为研究目标,主要围绕两方面展开课题:一、利用腺病毒载体介导的基因表达系统建立小鼠肝脏鞘磷脂合酶过表达模型;二、重点研究小鼠SMS过表达对动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)发生的影响。利用V型腺病毒载体分别构建携带SMS1和SMS2的重组腺病毒,静脉注射8周龄C57BL/6J小鼠,借助V型腺病毒的亲肝细胞性,使其携带的SMS基因在小鼠肝脏富集;通过蛋白水平(SMS活力检测)和mRNA水平(RT-PCR)的实验,确认SMS过表达,建立SMS小鼠肝脏过表达模型。利用模型小鼠分别检测SMS过表达导致的小鼠体内脂类代谢相关指标的变化:1、血浆脂质水平(HDL-胆固醇、卵磷脂、SM、TG,总胆固醇);2、肝脏脂质水平(胆固醇、甘油三酯、SM);3、血浆HDL脂蛋白以及非HDL脂蛋白水平;4、肝脏高密度脂蛋白受体SR-BI水平和ABCA1水平;5、小鼠体内HDL转换率以及小鼠主动脉根部动脉粥样硬化斑块损伤状况,从而明确小鼠肝脏SMS过表达在AS发生中所产生的影响。本实验获得如下结果:小鼠肝脏SMS过表达导致小鼠体内若干脂类代谢相关指标出现以下变化:1.肝SMS1 mRNA水平和SMS2 mRNA水平分别增加2.5和2.7倍(p＜0.001)2.肝SMS1活性和SMS2活性分别增加2.1和2.3倍(p＜0.001)3.HDL中SM和胆固醇含量减少,以及非HDL颗粒中SM和胆固醇含量升高,其中HDL-SM降低42%和38%(p＜0.05)、HDL-ch降低27%和25%(p＜0.05);non-HDL-SM增加50%和35%(p＜0.05)、non-HDL-ch增加64%和61%(p＜0.05)4.载脂蛋白Apo B水平升高(p＜0.01),Apo A-I无显著改变5.肝HDL受体SR-BI水平分别升高50%和55%(p＜0.01),选择性摄取HDL胆固醇脂的能力增强;ABCA1水平没有显著变化6.非HDL在鞘磷脂水解酶(SMase)处理后的凝聚能力增加(p＜0.0001)7.血浆HDL部分分解代谢速率增加(p＜0.02)8.SMS1和SMS2未呈现存在功能上的差异结论:1.小鼠肝脏SMS过表达可以引起SMS活力水平升高,促进血浆所有脂蛋白和脂质的变化以及代谢的变化向致AS方向转变,显示SMS升高有潜在的致AS作用。2.SMS1和SMS2在研究中未显示存在功能上的差异。3.SMS有望成为研究AS发生机制及筛选抗AS药物的新靶点。

全文目录

中文摘要  4-6
英文摘要  6-8
前言  8-11
第一部分:重组SMS腺病毒的构建、扩增纯化  11-27
  1.1.前言  11
  1.2.材料与方法  11-20
  1.3.结果  20-26
  1.4.结论  26-27
第二部分:小鼠肝脏SMS过表达模型的建立  27-34
  2.1.前言  27
  2.2.材料与方法  27-32
  2.3.结果  32-33
  2.4.结论  33-34
第三部分:小鼠肝脏SMS过表达对小鼠体内脂质、动脉硬化相关脂蛋白及受体水平的影响  34-50
  3.1.前言  34-35
  3.2.材料与方法  35-43
  3.3.结果  43-49
  3.4.结论  49-50
第四部分:小鼠肝脏SMS过表达对小鼠主动脉根部动脉粥样硬化斑块形成的影响  50-54
  4.1.前言  50
  4.2.材料与方法  50-53
  4.3.结果  53
  4.4.结论  53-54
讨论  54-58
结论  58-59
研究方向  59-60
参考文献  60-69
综述:鞘磷脂与动脉粥样硬化发生的关系  69-78
附录Ⅰ:本研究中所用到的常规分子生物学实验方法  78-88
附录Ⅱ:博士期间发表的论文  88-89
致谢  89-90

腺病毒介导的小鼠肝脏鞘磷脂合酶SMS过表达与动脉粥样硬化发生关系的研究

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