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肝细胞生长因子（HGF）受体c-met基因在肾脏中的表达调控研究

作　者: 张向红
导　师: 章静波；刘友华；张世馥
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 分子细胞生物学
关键词: 肝细胞生长因子(HGF) 受体(c-met) 表达调控 蛋白质相互作用 sp1 Sp3 过氧化压力 Egr-1 转化生长因子(TGF-β1) Smad
分类号: Q75
类　型: 博士论文
年　份: 2003年
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内容摘要


肝细胞生长因子(HGF)受体c-met属于酪氨酸受体超家族，是c-met原癌基因的表达产物。HGF／c-met信号系统对于细胞增殖、细胞分散、运动，存活以及细胞的分化起重要作用。作为HGF现已知的唯一的受体，c-met是一个可诱导基因，可以应答许多的细胞外信号包括细胞因子，生长因子及环境因素的影响。因此，c-met表达调控就成为关键的一环。肾脏是c-met表达丰富的器官之一。HGF／c-met信号传导途径对于胚胎发育过程中肾的器官发生，正常结构的维持和患病肾的修复和再生都起着重要作用。本文就c-met在正常肾脏中的组成性表达、以及在过氧化压力和慢性肾病情况下的表达情况及其内在的调控机制分别进行了研究。 我们首先探讨了在正常肾和几种肾细胞中肝细胞生长因子(HGF)受体(c-met)的表达模型和基本机制。免疫组化实验显示c-met在小鼠肾脏中广泛表达，这种表达方式和肾中Sp1和Sp3转录因子的表达方式关系密切。在体外，被检测的各种类型肾细胞中所表达的c-met水平有所不同，其表达水平和与细胞内Sp1／Sp3丰度成正比，Sp1和Sp3均能与c-met基因启动子区的GC盒结合。免疫共沉淀实验表明，Sp1和Sp3之间存在着直接的相互作用。在功能方面，Sp1明显激活c-met启动子活性。Sp3对c-met启动子有弱的激活作用，当与Sp1结合在一起作用时显著促进c-met转录。相反，通过转染Sp竞争性的寡聚核苷酸减少Sp蛋白以及利用光辉霉素A阻断Sp蛋白与DNA的结合均能抑制c-met表达。各种类型肾细胞的c-met受体是有功能的。在HGF刺激作用之后，能够诱导蛋白激酶B／Akt的磷酸化，且磷酸化的动力学模式不同。这些实验结果表明，在各种类型的肾细胞中，Sp转录因子家族成员对c-met基因表达的调控起着重要作用。研究发现HGF作用的靶细胞具有普遍性，在肾的结构和功能方面拥有比我们预期的更为广泛的应用前景。 在文章的第二部分，我们证明过氧化压力能显著地抑制肾上皮细胞中c-met

全文目录


摘要  5-8
Abstract  8-11
缩略语表  11-12
前言  12-17
第一部分 Sp_1和Sp_3转录因子对肾脏中HGF受体表达调控的研究  17-44
  摘要  17
  前言  17-19
  材料方法  19-24
  实验结果  24-39
    1、正常肾脏中c-met表达与Sp家族蛋白表达存在重叠  24-26
    2、在体外各类肾细胞中c-met表达水平和Sp家族蛋白的丰度具有相关性  26-29
    3、Sp1和Sp3与c-met启动子区GC盒结合  29-31
    4、Sp家族成员在功能上存在互相协同以促进c-met转录  31-34
    5、在肾上皮细胞中转染竞争性寡聚核苷酸可以消减Sp家族蛋白从而抑制c-met启动子活性  34-35
    6、阻抑Sp蛋白与DNA的结合抑制c-met的表达  35-36
    7、体外培养的不同类型肾细胞中c-met受体是有功能的  36-39
  讨论  39-44
第二部分 过氧化压力抑制c-met的表达是由Sp1与Egr-1转录因子的相互作用介导的  44-66
  摘要  44
  前言  44-46
  材料方法  46-49
  实验结果  49-62
    1、过氧化压力抑制c-met表达,同时诱导Egr-1的表达  49-52
    2、Egr-1的过表达抑制了肾小管上皮细胞中内源的c-met的表达  52-53
    3．在c-met启动子中应答过氧化压力的区域含有Egr-1和Sp1的结合位点  53-55
    4、Egr-1抑制c-met启动子活性,但不直接与顺式作用元件结合  55-58
    5、过氧化压力诱导产生的Egr-1减弱Sp1与其识别位点结合,但不影响细胞内的Sp1蛋白的丰度  58-60
    6、Egr-1和Sp1之间存在着直接的相互作用  60-62
  讨论  62-66
第三部分 Sp1与Smads相互作用介导TGF-β1诱导c-met的在肾上皮细胞中的表达  66-89
  摘要  66
  前言  66-68
  材料方法  68-73
  实验结果  73-85
    1、单侧输尿管阻塞(UUO)手术后阻塞的肾脏中c-met的表达被上调  73-75
    2、TGF-β1在体外诱导肾上皮细胞中c-met表达  75-76
    3、TGF-β1对c-met表达的诱导发生在转录水平  76-77
    4、TGF-β1诱导c-met表达需要Smad信号系统  77-79
    5、TGF-β1对c-met的诱导作用也依赖于Sp1转录因子的作用  79-81
    6、TGF-β1增强Smad和Sp1结合c-met启动子上SBE／Sp1位点  81-83
    7、Sp1和Smad之间直接的相互作用  83-85
  讨论  85-89
小结与展望  89-92
参考文献  92-102
论文综述  102-127
致谢  127-128
研究生简历  128

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