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人的可溶性肿瘤坏死因子受体拮抗剂筛选模型的建立及筛选和抗鼠Ⅰ型可溶性白细胞介素1受体拮抗剂660菌株的活性研究

作　者: 杜康平
导　师: 吴剑波
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 受体拮抗剂先导化合物筛选模型可溶性肿瘤坏死因子受体可溶性受体次级代谢产物抗生素微生物来源活性研究配基结合
分类号: R965
类　型: 博士论文
年　份: 2000年
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内容摘要

人的可溶性肿瘤坏死因子(TNF)是一种重要的细胞因子，具有广泛的生物学功能，通过与靶细胞膜表面的肿瘤坏死因子受体相结合并将信号传递到细胞内部而产生生理活性。现在已证实细胞表面肿瘤坏死因子受体(TNFR)有Ⅰ型和Ⅱ型两种类型的受体。细胞表面受体的胞外部分经蛋白酶切割可产生其可溶性形式，即Ⅰ型可溶性受体和Ⅱ型可溶性受体。本工作以昆虫细胞表达的人的Ⅰ型可溶性肿瘤坏死因子受体(sTNFRI)为靶点，建立了全新的、非放射性的受体与配基结合的受体拮抗剂筛选模型，由于所用受体为非全细胞或组织，高浓度发酵液对用此模型的筛选无影响。应用此模型从2000多种微生物代谢产物和50多种中草药等天然产物中，寻找sTNFRI拮抗剂。筛到2株阳性菌株和两种有活性的中草药。并对所筛选到的其中一株阳性菌株1487进行了部分活性成分的研究。以重组肿瘤坏死因子固定酶标板，用在昆虫细胞表达的sTNFRI建立了基于竞争性受体配基结合为原理的肿瘤坏死因子受体拮抗剂ELISA筛选模型。在未加入待筛选物，只有重组病毒感染细胞的上清液时，测得的吸光值在1.40左右，而用野生病毒感染细胞的上清液作为对照，吸光值仅为0.30以下。当加入的待筛选物中含有sTNFRI拮抗剂时，该拮抗剂与固定于酶标板上的TNF竞争结合sTNFRI，阻断抗sTNFRI抗体同sTNFRI结合，也就阻止后面的酶促放大反应，使所测得的吸光值下降，根据吸光值的改变来确定筛

全文目录

第一部分综述  5-42
  微生物来源的细胞因子受体拮抗剂的筛选  5-38
  论文  38-42
    中文摘要  38-40
    英文摘要  40-42
第二部分人的可溶性肿瘤坏死因子受体拮抗剂筛选模型的建立及拮抗剂筛选  42-63
  一、前言  42-45
  二、实验部分  45-50
    (一)、实验材料与仪器  45-48
    (二)、实验方法  48-50
  三、结果与讨论  50-59
    1. 昆虫细胞Sf_9感染病毒后细胞形态学观察  50
    2. 肿瘤坏死因子受体拮抗剂筛选模型的建立  50-58
    3. 真菌1487中活性成分的提取、分离纯化  58-59
  四、结论  59-61
  参考文献  61-63
第三部分抗鼠Ⅰ型可溶性白细胞介素1受体拮抗剂菌株660化学研究  63-84
  一、前言  63-65
  二、实验部分  65-68
    (一)、实验材料与仪器  65-66
    (二)、实验方法  66-68
  三、性质与结构鉴定  68-75
    1. 化合物1的性质与结构鉴定  68-69
    2. 化合物2的性质与结构鉴定  69-70
    3. 化合物4的性质与结构鉴定  70-72
    4. 化合物6的性质与结构鉴定  72-75
  四、讨论  75-77
  五、结论  77-80
  参考文献  80-83
  致谢  83-84
第四部分附化合物光谱图  84-109

人的可溶性肿瘤坏死因子受体拮抗剂筛选模型的建立及筛选和抗鼠Ⅰ型可溶性白细胞介素1受体拮抗剂660菌株的活性研究

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