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重组非糖基化尿激酶型纤溶酶原激活剂的研究

作　者: 杨波
导　师: 李天德；胡显文
学　校: 中国人民解放军军医进修学院
专　业: 心血管内科
关键词: 尿激酶原(单链尿激酶型纤溶酶原激活剂) 突变体 非糖基化 抗凝血酶
分类号: R341
类　型: 博士论文
年　份: 2005年
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内容摘要


目的 构建非糖基化、抗凝血酶激活的高分子量尿激酶原突变体。 方法 使用PCR扩增的方法,将302位天冬酰胺(Asn302)突变为丙氨酸(Ala302),去掉糖基化位点;将156位精氨酸(Arg156)突变为赖氨酸(Lys156),去掉凝血酶作用位点。 结果 PCR产物经琼脂糖电泳鉴定分子量为1296Da(道尔顿,dalton)。突变体与pUC19克隆载体用HindⅢ、XbaⅠ双酶切。二者连接后,转化入DH5α感受态细胞(大肠杆菌)中。用蓝白斑筛选法识别PCR产物是否与pUC19载体连接。包含PCR产物的克隆呈现白色。将白色克隆提质粒送测序。测序正确的基因与pIPES双表达载体连接后备用。 结论 非糖基化抗凝血酶的高分子量尿激酶原突变体构建成功。

全文目录


英文缩略词表  5-6
前言  6-9
实验一、非糖基化高分子量尿激酶原的研究  9-87
  第一部分、高分子量尿激酶原突变体基因的构建  9-35
  第二部分、突变体基因在CHO细胞的表达与鉴定  35-53
  第三部分、蛋白质产物的纯化与鉴定  53-69
  第四部分、蛋白质产物性质的研究  69-86
  小结  86-87
实验二、非糖基化低分子量尿激酶原的研究  87-103
  摘要  87-89
  第一部分、低分子量尿激酶原突变体基因的构建  89-94
  第二部分、突变体基因在CHO细胞的表达与鉴定  94-97
  第三部分、蛋白质产物的纯化与鉴定  97-101
  第四部分、蛋白质产物性质的研究  101
  讨论  101-103
总结及展望  103-105
参考文献  105-113
综述  113-130
致谢  130-131
附录  131-133

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 人体生物化学、分子生物学
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