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中药成份配方“皮癣净”凝胶剂的研制及其抗真菌活性研究

作　者: 吴长龙
导　师: 殷中琼；魏琴
学　校: 四川农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 皮肤癣菌药敏试验 “皮癣净”凝胶剂质量控制高效液相色谱
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

皮肤癣菌是一种多形态的丝状真菌,通常可产生节孢子,分隔的菌丝,大小分生孢子和厚壁孢子,常引起皮肤及其皮下蛋白组织的感染,是人和动物皮肤感染率较高的一种致病菌。临床常使用化学药物治疗,但是其价格昂贵并存在较严重的毒副作用。为开发新型抗真菌药物,本研究选择实验室前期筛选得到的具有较好抗白色念珠菌的中药(苦参,Sophora flavescens Ait、土茯苓,Smilax glabra Roxb、白鲜皮,Dictamnus dascarpus Turcz、土荆皮,Cortex Pseudolaricis)作为研究对象,利用现代提取方法,分别对其有效成分进行提取,分别考察了中药提取物对石膏样小孢子菌(Microsporum gypseum)、犬小孢子菌(Microsporum canis)、须癣毛癣菌(Trichophyton mentagrophytes)的体外抗真菌活性及其体外联合抑菌活性,筛选了中药提取物的最佳配比,并制成凝胶剂,在此基础上对,对凝胶剂的稳定性、定性鉴别和含量进行研究。主要研究结果如下：1、采用冷凝回流提取方法和M38-A液体微量稀释法,对苦参、白鲜皮、土茯苓和土荆皮四种中药的乙醇提取物得率及其抗真菌活性进行了研究。结果显示,苦参、白鲜皮、土茯苓和土荆皮乙醇提取物得率分别为19.54%、10.6%、14.12%和26.05%；苦参、白鲜皮、土茯苓和土荆皮乙醇提取物对三种皮肤癣菌的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC)和最低杀真菌浓度(minimal fungicidal concentration,MFC)分别为,石膏小孢子菌：0.7813mg/mL和1.563mg/mL,3.125mg/mL和6.25mg/mL,100mg/mL和>100mg/mL,3.125mg/mL和6.25mg/mL；须癣毛癣菌：0.7813mg/mL和1.563mg/mL,3.125mg/mL和6.25mg/mL,50mg/mL和100mg/mL,0.7813mg/mL和1.563mg/mL；犬小孢子菌：3.125mg/mL和6.25mg/mL,1.563mg/mL和3.125mg/mL,25mg/mL和50mg/mL,0.7813mg/mL和1.563mg/mL。结果表明,苦参乙醇提取物、白鲜皮乙醇提取物和土荆皮乙醇提取物均具有明显的抑菌作用和杀菌作用。2、采用棋盘微量稀释法,考察苦参、白鲜皮和土荆皮乙醇提取物对石膏样小孢子菌、犬小孢子菌和须癣毛癣菌三株皮肤癣菌的联合抗真菌作用,并以联合抑菌指数(fractiona inhibitory concentration index, FICI)对其联用效果进行评价。结果发现苦参乙醇提取物与白鲜皮乙醇提取物两者联合应用,对石膏样小孢子菌、犬小孢子菌和须癣毛癣菌的FICI直分别为1,0.75和1,均小于或等于1：按照评价标准,苦参乙醇提取物和白鲜皮乙醇提取物两者联用,对三株真菌的抑制效果呈相加作用：土荆皮乙醇提取物与苦参乙醇提取物和白鲜皮乙醇提取物联合应用,其IFIC值大于和等于2,按照评价标准,土荆皮乙醇提取物与苦参乙醇提取物和白鲜皮乙醇提取物两两联用,对三株真菌的抑制效果呈无关和拮抗作用。3、应用均匀设计处理手段与药效学相结合的方法对中药成分配方“皮癣净”透皮剂中苦参乙醇提取物、白鲜皮乙醇提取物和土茯苓乙醇提取物三种成份的最佳配比进行筛选。试验选用均匀设计表U9*(94),以各个水平对石膏小孢子菌(Microsporum gypseum)的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC)作为考察指标。经过数理统计方法确定“皮癣净”透皮剂三味中药乙醇提取物的最佳配比为：苦参乙醇提取物：白鲜皮乙醇提取物：土茯苓乙醇提取物=5：9：5。4、优选“皮癣净”凝胶剂的基质组成,考查其稳定性。采用正交试验设计,以卡波姆940、中药配方、甘油和氮酮用量为因素,以凝胶剂的外观、耐热、耐寒和加速离心实验为考查指标,确定了主要基质的最佳组成。“皮癣净”凝胶剂最佳处方为1.2%的卡波姆940,5%的主药,15%的甘油,4%的氮酮。结果表明：凝胶剂外观颜色均匀,涂布性能优越,耐寒耐热试验均无变化,且在4000 r/min条件下离心100min无分层现象。该制剂的制备工艺简单、制剂稳定、安全。5、采用LC02010HT高效液相色谱仪,建立“皮癣净”凝胶剂中白鲜碱的含量测定方法。用甲醇超声,用Gemini 5u C18色谱柱,流动相为甲醇-水(55：45v／v),流速为1.OmL／min,检测波长为235nm,柱温：30℃；进样量：l0μL。在0.216-86.4μg范围内,白鲜碱的峰面积与进样量间有良好的线性关系,r=0.9993(n=7)；精密度考察其RSD为0.26%;加样回收率为99.69%,RSD为0.57%；“皮癣净”凝胶剂中白鲜碱的平均含量为88.49μtg·g-1。结果表明：仪器精密度良好,该法准确可靠、重现性好,操作简便,快速。

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