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结核分枝杆菌耐氨基糖苷类药物相关基因突变的研究

作　者: 黄芳
导　师: 郝晓柯；刘家云
学　校: 第四军医大学
专　业: 临床检验诊断学
关键词: 结核分枝杆菌 耐药 氨基糖苷类抗菌药物 基因突变 eis基因 aac(2’)-Ic基因 tlyA基因 T细胞免疫功能
分类号: R52
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


结核分枝杆菌耐药问题已引起世界广泛关注,从对异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素等一线药物耐药,到目前广泛发生对二线药物卡那霉素、阿米卡星等耐药,产生多重耐药结核杆菌(multi-drug resistance tuberculosis,MDR-TB),甚至广泛耐药结核杆菌(extensively drug-resistant tuberculosis,XDR-TB)。结核分枝杆菌对作为二线主要药物的氨基糖苷类抗菌药物的耐药机制为多种修饰酶的产生,以及由16S rRNA介导的药物作用靶位改变。本研究即选取与耐药相关代表酶的编码基因,以临床分离耐药株为研究对象,与结核分枝杆菌标准株H37Rv及临床分离敏感株进行比对,找寻与耐药相关的基因突变位点,了解结核分枝杆菌基因突变对氨基糖苷类抗菌药物的耐药作用机制。结核分枝杆菌感染宿主后,宿主体内的T淋巴细胞发挥主要的细胞免疫防御功能。T淋巴细胞相关指标的变化往往与结核分枝杆菌致病程度、化疗效用密切相关,这种变化在对药物耐药与敏感的病人身上是否有所变化,具体的变化情况如何?我们以临床资料为基础,进行了相关研究。1结核分枝杆菌氨基糖苷抗菌药物耐药基因突变研究探讨结核分枝杆菌eis、aac(2’)-Ic、tlyA基因突变与氨基糖苷抗菌药物耐药之间的相互关系。我们以已确定耐一线药物(异烟肼、利福平、乙胺丁醇、链霉素)的结核分枝杆菌临床分离株为研究对象,应用BACTECMGIT 960测定其二线药物(阿米卡星、卡那霉素等)的耐药情况,同时应用基因测序的方法测定结核分枝杆菌eis、aac(2’)-Ic、tlyA基因突变情况,分析基因突变与氨基糖苷抗菌药物耐药之间的相互关系。结果显示,①在氨基糖苷耐药的部分结核分枝杆菌中,eis基因487位碱基出现突变,相应的163位氨基酸密码子由CGT突变为CAT,即由缬氨酸变为异亮氨酸。eis基因V163I突变(缬氨酸变为异亮氨酸)可能与结核分枝杆菌耐氨基糖苷类药物有关。②aac(2’)-Ic基因没有发现突变,仍需要增加样本的含量或者延长基因测定范围。③所有临床分离菌株tlyA基因33位碱基由A突变为G,相应的密码子由CTA突变为CTG,均为亮氨酸同义突变,标准菌株H37Rv未见tlyA基因突变,tlyA基因33位碱基突变有可能作为区分结核分枝杆菌临床分离株与标准株的标志之一。2结核病人T细胞亚群分析以临床病人资料为基础,按照初治、复治及结核分枝杆菌耐药情况进行分组,分为初治耐药组,初治敏感组,复治耐药组。采用BACTEC MGIT960系统进行药敏测定;流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群CD3~+、CD4~+、CD8~+细胞绝对值及百分比、CD4~+/CD8~+值。数据全部采用SPSS16.0统计学软件处理。各组间差异显著性分析采用多变量方差分析(MANOVA),以P<0.05为具有统计学意义。结果显示T细胞数量及亚型、白细胞(含中性粒细胞、淋巴细胞)数量在各组之间均无统计学意义。本研究由于样本容量等原因并不能说明T细胞免疫功能在结核分枝杆菌耐药方面的影响及作用,需要更多的临床资料进行深入研究。

全文目录


缩略语表  5-7
中文摘要  7-10
ABSTRACT  10-13
前言  13-16
文献回顾  16-31
  一、结核病流行概述  16-17
  二、 结核病治疗与氨基糖苷类抗菌药物  17-18
  三、细菌耐抗菌药物机制  18-20
  四、结核分枝杆菌耐氨基糖苷类抗菌药物基因  20-28
  五、耐药基因突变检测方法  28-31
第一部分 结核分枝杆菌临床分离株对抗结核二线药物耐药性测定  31-37
  1 实验材料  31-32
  2 实验方法  32-33
  3 实验结果  33-35
  4 讨论  35-37
第二部分 基因突变与结核分枝杆菌氨基糖苷类药物耐药研究  37-68
  1 实验材料  37-39
  2 实验方法  39-50
  3 实验结果  50-66
  4 讨论  66-68
第三部分 耐药结合分枝杆菌感染与T 淋巴细胞亚群的相关性研究  68-74
  1 实验材料  68-69
  2 实验方法  69
  3 结果  69-72
  4 讨论  72-74
小结  74-75
参考文献  75-82
个人简历和研究成果  82-83
致谢  83

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 结核病
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