学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

益气活血中药延缓增龄与高血压所致血管老化的机制研究

作　者: 陶丽丽
导　师: 雷燕
学　校: 中国中医科学院
专　业: 中西医结合临床
关键词: 血管老化血管平滑肌细胞高血压增龄益气活血人参三七川芎提取物 p16
分类号: R285
类　型: 博士论文
年　份: 2011年
下　载: 91次
引　用: 1次
阅　读: 论文下载

内容摘要

人口老龄化是现代社会发展的重要问题之一,心血管疾病是老龄人口死亡的主要病因,年龄是心血管疾病的独立危险因素。在增龄和心血管疾病中存在着明显的血管老化的表现,因此,对血管老化的研究成为老年病研究的热点。血管老化病变特征为血管壁的增厚和硬化,可以表现在血管内皮细胞、血管平滑肌细胞和胞外基质水平。血管内膜增厚,内皮细胞结构和功能的改变,是血管老化在内膜的表现,本课题的前期研究已经进行了初步探讨。平滑肌细胞是血管中膜的主要成分,其异常增殖、迁移是血管老化的主要病理变化。本研究以血管老化为研究目的,在前期研究的基础上,选取血管平滑肌细胞为切入点,从整体、细胞和分子水平对增龄和疾病所致血管老化进行研究,通过探讨益气活血中药延缓血管老化的作用和机制,为中医药延缓血管老化提供科学依据。本研究分为三个部分：文献综述、基础研究和临床研究。1.文献综述通过对衰老相关文献的整理和归纳,总结了中西医关于衰老的理论,并对中医药延缓衰老的机制进行了阐述；通过对动脉僵硬度相关文献的复习,综述了常用检测动脉僵硬度的检测方法、临床意义和研究进展。2.基础研究包括以下四个基础实验：实验一：增龄与高血压对大鼠主动脉结构影响的实验研究目的：观察增龄与高血压对动脉血管壁结构的影响。方法：分别对老年大鼠和青年大鼠、白发性高血压大鼠(SHR)和WKY大鼠的胸主动脉进行HE染色和Masson染色。结果：HE染色显示,老年大鼠和SHR大鼠的主动脉内膜增厚,隆起,中膜显著增厚,平滑肌细胞向内膜迁移,细胞增大；Masson染色显示,老年大鼠和SHR大鼠主动脉平滑肌、胶原相对含量显著升高。结论：增龄和高血压均可导致血管结构的改变,呈现血管老化的特征,提示高血压能诱发、促进血管老化的发生实验二：大鼠胸主动脉平滑肌细胞的原代培养和鉴定目的：探讨大鼠胸主动脉平滑肌细胞原代培养的方法,为血管病变的研究提供重要的实验材料。方法：采用组织贴块法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,用倒置相差显微镜观察其生长状况,用免疫细胞化学染色法对细胞进行鉴定。结果：镜下可见培养细胞呈典型的“峰-谷”状生长,免疫组化染色显示胞浆内α-actin阳性表达。结论：本法简便、可靠,可获纯度较高、结构和功能良好的血管平滑肌细胞,为研究心血管疾病提供了良好的实验材料。实验三：益气活血中药延缓老年大鼠血管老化的机制研究目的：观察老年大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)衰老的病理变化,以及人参三七川芎提取物的干预作用和机制。方法：采用原代培养的方法分别建立老年大鼠VSMC模型和青年大鼠VMSC模型,实验分为青年组、老年组、普罗布考(Probucal)组、中药低剂量组和中药高剂量组。采用SA-β-gal染色法观察细胞衰老改变,流式细胞仪分析细胞周期,免疫细胞化学法分析VSMC的MMP-9和TGFβ1含量,免疫荧光染色法检测MLCK的表达,RT-PCR和Western Bloting法检测各组细胞p16、cyclinD1、CDK4、pRb和PPARγ的mRNA和蛋白表达。结果：与青年大鼠相比,老年大鼠的VSMC增殖能力明显增强,人参三七川芎提取物能够减少老年大鼠VSMC的SA-β- gal表达,使细胞周期停滞于G1期,降低VSMC中MMP9、TGFβ1的表达,升高MLCK的表达,并且增加p16、Rb、PPARγ的mRNA和蛋白表达,减少cyclinD1、CDK4的mRNA和蛋白表达。结论：人参三七川芎提取物能够延缓老年大鼠VSMC衰老,通过细胞因子和p16-CyclinD/CDK-RB途径抑制VSMC增殖、迁移,增强VSMC的收缩能力,减少增龄导致的血管结构改变,提高血管弹性,延缓血管老化。实验四：益气活血中药延缓SHR大鼠血管老化的机制研究目的：观察SHR大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)哀老的病理变化,以及人参三七川芎提取物的干预作用和机制。方法：采用原代培养的方法分别建立WKY大鼠VSMC模型和SHR大鼠VMSC模型,实验分为WKY组、SHR组、缬沙坦(Valsartan)组、中药低剂量组和中药高剂量组。采用SA-β-gal染色法观察细胞衰老改变,流式细胞仪分析细胞周期,免疫细胞化学法分析VSMC的MMP-9和TGFβ1含量,免疫荧光染色法检测MLCK的表达,RT-PCR和Western Bloting法检测各组细胞p16、cyclinD1、CDK4、pRb和PPARγ的mRNA和蛋白表达。结果：与WKY大鼠相比,SHR大鼠的VSMC增殖能力明显增强,人参三七川芎提取物能够减少SHR大鼠VSMC的SAβ-gal表达,使细胞周期停滞于G1期,降低VSMC中的MMP9、TGFβ1、MLCK表达,并且增加p16、Rb、PPARγ的mRNA和蛋白表达,减少cyclinD1、CDK4的nRNA和蛋白表达。结论：人参三七川芎提取物能够延缓SHR大鼠VSMC衰老,通过细胞因子和p16-CyclinD/CDK-RB途径抑制VSMC增殖、迁移,降低VSMC的张力,减少高血压导致的血管结构改变,延缓血管老化。3.临床研究原发性高血压中医证侯特征及与血管老化相关性的研究目的：研究原发性高血压中医证侯特征及与血管老化的相关性。方法：选择111例原发性高血压患者作为研究对象,24例健康人作为对照组,对高血压患者的临床症状进行证素分类,分析其临床证型分布,比较年龄、BMI、脉压、PWV和MMP-9、AGEs与高血压证型的相关性。结果：1.痰阻和阴虚是高血压患者的主要证素特征,其后依次是阳亢、气虚、血瘀、阳虚和血虚；2.高血压主要的临床证型为：阴虚阳亢证、痰浊壅盛证、痰瘀互阻证和阴阳两虚证；3.阴虚阳亢证的高血压患者年龄较小,体重指数(BMI)低于其他各组；4.痰瘀互阻证的年龄、PP、PWV显著增高,血清MMP-9、AGEs的含量也高于其他组。结论：中医的痰在高血压病的发病中起着重要作用,随着病程的进展,痰瘀互结与血管老化密切相关。

全文目录

中文摘要  6-9
ABSTRACT  9-14
英文缩略词表  14-16
前言  16-18
第一部分文献综述  18-40
  综述一: 中医药延缓衰老机制的研究进展  18-28
    参考文献  24-28
  综述二: 动脉僵硬度的研究进展  28-40
    参考文献  35-40
第二部分: 基础研究  40-112
  第一章增龄与高血压对大鼠主动脉结构影响的实验研究  40-46
    1 材料与方法  40-41
    2. 结果  41-43
    3. 讨论  43-44
    4. 小结  44
    参考文献  44-45
    附图  45-46
  第二章大鼠胸主动脉平滑肌细胞的原代培养和鉴定  46-54
    1. 材料与方法  46-49
    2. 结果  49-50
    3. 讨论  50-52
    4. 小结  52
    参考文献  52-54
  第三章益气活血中药延缓老年大鼠血管老化的机制研究  54-86
    1. 材料与方法  54-63
    2. 结果  63-75
    3. 讨论  75-80
    4. 小结  80
    参考文献  80-86
  第四章益气活血中药延缓高血压大鼠血管老化的机制研究  86-112
    1. 材料与方法  86-90
    2. 结果  90-102
    3. 讨论  102-107
    4. 小结  107
    参考文献  107-112
第三部分: 临床研究  112-120
  原发性高血压中医证侯特征及与血管老化相关性的研究  112-120
    1. 资料与方法  112-114
    2. 结果  114-117
    3. 讨论  117-118
    4. 小结  118
    参考文献  118-120
结语  120-122
论文创新点  122-123
附录中医药科研项目查新报告书  123-128
致谢  128-130
个人简历  130-131

益气活血中药延缓增龄与高血压所致血管老化的机制研究

内容摘要

全文目录

相似论文