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动物源沙门氏菌耐药性及质粒介导喹诺酮类耐药基因的流行病学研究

作　者: 覃春红
导　师: 林居纯
学　校: 四川农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 沙门氏菌喹诺酮类药物质粒耐药基因脉冲场凝胶电泳
分类号: S855.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

沙门氏菌是常见的人畜共患病原菌,对其研究具有重要的医学、兽医学和公共卫生学意义。随着喹诺酮类药物在畜牧养殖业中的大量使用及滥用,细菌出现了严重的耐药性。对动物源沙门氏菌进行药物敏感性试验及质粒介导喹诺酮类耐药基因分子流行病学研究,有助于了解耐药菌株的产生和传播,为指导临床合理用药提供依据。本文从2003年到2010年分离自不同动物源的316株沙门氏菌中,经生化鉴定和血清型鉴定,发现12种血清型,其中鸡白痢沙门氏菌占58.9%(186株/316株),菲利斯河沙门氏菌占7.9%(25株/316株),吉韦沙门氏菌占7.9%(25株/316株)。采用微量稀释法进行沙门氏菌对20种抗菌药物的药物敏感试验。结果显示,除对头孢唑啉的耐药率为8.2%以外,对其他药物的耐药率均超过10%,依次为萘啶酸85.4%、磺胺异嗯唑85.4%、多西环素72.2%、四环素60.8%、链霉素49.1%、阿莫西林/克拉维酸48.1%、氨苄西林41.1%、氟苯尼考36.7%、头孢噻呋29.4%、庆大霉素28.5%、氯霉素28.5%、诺氟沙星19.9%、卡那霉素17.4%、左氧氟沙星15.8%、氧氟沙星14.9%、环丙沙星12.3%、恩诺沙星12.3%、阿米卡星12.0%、洛美沙星10.4%。不同动物源菌株的耐药情况是,猪源性及牛源性菌株耐药率高于鸡源性和鸭源性菌株；不同地区菌株的耐药情况是,四川省和广东省菌株耐药较江西省和河南省菌株严重,江苏省菌株耐药率最低。耐药沙门氏菌菌株主要表现出多重耐药性,呈4耐和5耐,其中猪源和牛源菌株主要呈10耐和11耐。检测316株沙门氏菌的喹诺酮类耐药基因,未检出qnrC、qnrD、qnrS和qepA基因,检出aac(6’)-Ib-cr、qnrB和oqxAB基因,以aac(6’)-Ib-cr为主,oqxAB为首次在我国动物源沙门氏菌中报道,且首次在吉韦(Give)沙门氏菌中检测出qnrB2基因。PMQR阳性菌菌株进行gyrA、gyrB和parC突变检测,除S YAP10-2菌株无突变外,其余菌株均检测有突变。通过Southern blot发现aac(6’)-Ib-cr基因定位在一个大小为182kb的质粒上。PMQR阳性菌株进行PFGE分子分型,结果显示,53株沙门氏菌共有5种PFGE谱型,其中25株qnrB2阳性菌株分离自鸡源、猪源和牛源,但属于同一种PFGE谱型,表明qnrB2基因以垂直传播的方式进行传播；25株菲利斯河沙门氏菌携带有不同的耐药基因,但属于同一个PFGE谱型,说明25株菌属于同一克隆菌；其余3株沙门氏菌分属于不同的PFGE谱型。通过对316株沙门氏菌进行耐药性和质粒介导喹诺酮类耐药基因的流行病学研究发现,沙门氏菌对临床抗菌药物耐药较严重,质粒介导的喹诺酮类耐药基因通过垂直传播的方式进行耐药性扩散。这为指导临床合理应用抗菌药物,预防和控制耐药菌和耐药基因的传播提供了科学依据。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-11
缩略词表  11-12
第一部分文献综述及目的意义  12-23
  1 文献综述  12-22
    1.1 沙门氏菌的耐药情况  12-14
    1.2 沙门氏菌血清学研究现状  14
    1.3 质粒介导耐喹诺酮类基因研究现状  14-21
      1.3.1 qnr的研究现状  14-19
      1.3.2 aac(6’)-Ib-cr耐药基因的研究现状  19
      1.3.3 质粒介导喹诺酮外排泵oqxAB和qepA  19-20
      1.3.4 PMQR耐药基因的相互作用  20-21
    1.4 脉冲场凝胶电泳(Pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)  21-22
  2 研究的目的意义  22-23
第二章沙门氏菌的分离鉴定及耐药性检测  23-43
  1 材料与方法  23-28
    1.1 材料  23-25
      1.1.1 培养基  23
      1.1.2 菌株  23
      1.1.3 抗菌药物标准品及其工作母液配制  23-24
      1.1.4 诊断血清  24-25
      1.1.5 其他  25
      1.1.6 主要仪器设备  25
    1.2 方法  25-28
      1.2.1 菌株的分离、鉴定与保存  25-27
      1.2.2 抗菌药物敏感性试验  27-28
  2 结果与分析  28-39
    2.1 沙门氏菌的培养特性及镜检  28
    2.2 沙门氏菌的生化和血清型鉴定  28-29
    2.3 疑似菌株PCR鉴定  29-30
    2.4 分离的沙门氏菌对不同抗菌药物的耐药情况  30
    2.5 不同来源沙门氏菌对抗菌药物耐药性比较  30-33
      2.5.1 不同年份分离的沙门氏菌对不同抗菌药物的耐药情况  30-31
      2.5.2 不同动物源分离的沙门氏菌对不同抗菌药物的耐药情况  31-32
      2.5.3 不同地区分离的沙门氏菌对不同抗菌药物的耐药情况  32-33
    2.6 沙门氏菌多重耐药情况比较分析  33-39
  3 讨论  39-43
    3.1 沙门氏菌的鉴定  39
    3.2 沙门氏菌血清型分析  39-40
    3.3 沙门氏菌耐药性比较  40-42
    3.4 合理使用抗生素  42-43
第三章沙门氏菌PMQR耐药基因和QRDR突变检测  43-58
  1 材料与方法  43-49
    1.1 材料  43-44
      1.1.1 试验菌株  43
      1.1.2 培养基  43
      1.1.3 分子生物学试剂盒及其它试剂  43-44
      1.1.4 主要设备及仪器  44
    1.2 方法  44-49
      1.2.1 模板的制备  44
      1.2.2 引物的设计与合成  44-45
      1.2.3 质粒介导喹诺酮类耐药基因的PCR扩增  45-47
      1.2.4 aac(6’)-Ib-cr基因的检测  47
      1.2.5 沙门氏菌喹诺酮耐药性决定区(QRDR)的突变检测  47-48
      1.2.6 耐药基因PCR产物的检测  48-49
  2 结果与分析  49-54
    2.1 PMQR基因检测情况  49-51
    2.2 不同动物源PMQR因子的筛选鉴定  51-52
    2.3 不同年代PMQR因子的筛选鉴定  52
    2.4 部分阳性菌株测序结果  52-53
    2.5 菌株耐药基因型与耐药表型的相关性  53
    2.6 沙门氏菌的喹诺酮耐药性决定区(QRDR)突变检测  53-54
  3 讨论  54-58
    3.1 沙门氏菌PMQR基因流行情况  54-55
    3.2 沙门氏菌gyrA、gyrB和parC基因突变分析  55-56
    3.3 菌株耐药表型与喹诺酮类耐药基因的关系  56-58
第四章沙门氏菌的PMQR基因定位及PFGE分子分型  58-73
  1 材料与方法  58-67
    1.1 材料  58-61
      1.1.1 菌株  58-60
      1.1.2 培养基及试剂配制  60-61
      1.1.3 分子生物学试验试剂  61
      1.1.4 主要设备及仪器  61
    1.2 方法  61-67
      1.2.1 细菌质粒DNA的提取  61-62
      1.2.2 Southern blot  62-64
      1.2.3 脉冲场凝胶电泳(Pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)  64-67
  2 结果与分析  67-71
    2.1 质粒DNA上aac(6’)-Ib-cr耐药基因定位  67-69
    2.2 沙门氏菌的分子分型  69-71
  3 讨论  71-73
    3.1 aac-Ib-cr耐药基因定位  71
    3.2 脉冲场凝胶电泳结果及讨论  71-73
第五章结论和创新  73-75
  1 结论  73-74
  2 创新  74-75
参考文献  75-86
致谢  86-87
附录  87-98
攻读学位期间发表的学术论文目录  98

动物源沙门氏菌耐药性及质粒介导喹诺酮类耐药基因的流行病学研究

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