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高产环孢菌素A镰刀菌的育种及遗传特性研究

作 者: 邓立新
导 师: 黄建忠
学 校: 福建师范大学
专 业: 微生物学
关键词: 环孢菌素A 茄病镰刀菌 雪白白僵菌 18S rDNA分子标记 原生质体 丙氨酸消旋酶
分类号: Q93
类 型: 硕士论文
年 份: 2008年
下 载: 57次
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内容摘要


本研究的目的在于选育高产环孢菌素的镰刀菌菌株,提高这种产生重要免疫抑制剂工业菌株的经济效益;研究低产和高产菌株遗传特性的差异,了解镰刀菌环孢菌素生物合成机制。本文首先通过18S rDNA分子标记鉴定环孢菌素A产生菌421502的分类学位置,确定该菌株属于镰刀菌,与传统分类学鉴定结果一致。利用蜗牛酶,优化酶解条件,获得高产量的原生质体,原生质体浓度为7×10~5个/ml。在高渗PDA培养基上原生质体获得再生。原生质体形成率和再生率分别为62.8%和29.6%。利用原生质体激光诱变获得高产菌株。设计嵌套引物通过两轮PCR克隆出镰刀菌421502的丙氨酸消旋酶基因部分片段,证明与雪白白僵菌的丙氨酸消旋酶基因高度同源。

全文目录


摘要  2-3
Abstract  3-4
中文文摘  4-8
第1章 绪论  8-26
  1.1 课题背景  8-11
  1.2 环孢菌素A的化学  11-13
  1.3 环孢菌素A的药理及毒理学  13-15
  1.4 环孢菌素A产生菌育种研究进展  15-19
  1.5 环孢菌素A生物合成机制研究进展  19-24
  1.6 环孢菌素产生菌遗传特性  24-25
  1.7 本研究的目的和意义  25-26
第2章 18S rDNA分子标记  26-34
  2.1 前言  26
  2.2 材料  26
  2.3 方法  26-27
  2.4 结果与分析  27-32
  2.5 小结和讨论  32-34
第3章 原生质体制备和再生  34-38
  3.1 前言  34
  3.2 材料  34
  3.3 方法  34-35
  3.4 结果与分析  35-37
  3.5 小结和讨论  37-38
第4章 高产菌株选育  38-48
  4.1 前言  38
  4.2 材料  38-39
  4.3 方法  39-41
  4.4 结果与分析  41-46
  4.5 小结和讨论  46-48
第5章 环孢菌素合成限速酶—丙氨酸消旋酶基因克隆  48-62
  5.1 前言  48-51
  5.2 材料  51
  5.3 方法  51-53
  5.4 结果与分析  53-60
  5.5 小结和讨论  60-62
结论  62-64
附录  64-66
参考文献  66-70
攻读学位期间承担的科研任务与主要成果  70-72
致谢  72-74
个人简历  74-76

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中图分类: > 生物科学 > 微生物学
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