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Cd28抗体与抗原结合的特性及介导的效应研究

作　者: 仇俊兰
导　师: 邱玉华
学　校: 苏州大学
专　业: 免疫学
关键词: B7/CD28协同刺激信号动物模型 CD28单克隆抗体
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

CD28分子的基因定位于人2号染色体q33-34区,由1120核苷酸组成,表达于大多数静止及活化的T细胞,约95% CD4+T和50% CD8+T细胞表达该分子。此外,部分NK细胞和人恶性浆细胞也表达CD28分子。B7-(1CD80)和B7-(2CD86)是CD28的天然配体,CD28分子与表达在抗原呈递细胞表面的相应配体B7-1和B7-2结合,从而产生T细胞应答所需的协同刺激信号。B7-CD28信号并非仅局限性地产生于抗原呈递细胞与T细胞之间,已在某些肿瘤细胞如多发性骨髓瘤细胞,白血病细胞等也发现异常的B7-CD28信号通路,且该通路可能参与肿瘤的恶性增殖与转移。通过特异性抗体封闭CD28分子,有可能对肿瘤细胞的生长发挥抑制作用。本研究旨在运用自行制备的CD28抗体,以转染人CD28基因的小鼠T淋巴瘤细胞株及天然表达CD28分子的人白血病细胞株Jurkat为研究对象,在体外分析抗体对上述细胞生长与增殖影响的基础上,通过建立肿瘤模型,探讨抗体对肿瘤细胞的成瘤及肿瘤消长的影响,以期寻找具有抗瘤作用的生物制剂。【目的】制备鼠抗人CD28分子单克隆抗体并鉴定其生物学功能。【方法】采用本室建立的腹水诱生法制备单抗并经Protein G亲和层析分离纯化。间接免疫荧光法分析单克隆抗体效价;FCM分析单克隆抗体识别的抗原位点;FCM分析单克隆抗体对不同细胞株人多发性骨髓瘤细胞(U266)、小鼠淋巴瘤细胞转入CD28基因细胞株(CD28-T)和人白血病细胞株(Jurkat)膜型CD28分子的识别。【结果】腹水形成率为90%以上,收获量为5ml/只以上。腹水中抗体蛋白的得率达3mg/ml。纯化抗体用于间接免疫荧光检测的用量为0.5μg/5×105。竞争抑制试验表明该单抗能完全阻断标准鼠抗人CD28抗体与相应抗原的结合,提示其识别的抗原表位与对照抗体相同或相似。FCM分析表明,CD28 mAb能良好地识别多种细胞表面膜型CD28分子。【结论】制备了鼠抗人CD28分子mAb(命名为SQA-11),为探讨CD28信号转导在肿瘤生长与转移过程中的作用及机制奠定了物质基础。【目的】探讨SQA-11体内、外对CD28+肿瘤细胞的生长与增殖的影响作用,以期寻找具有抗瘤作用的生物制剂。【方法】MTT法体外分析SQA-11对CD28-T和Jurkat生长和增殖的影响;建立CD28-T与Jurkat细胞的Balb/c裸鼠的肿瘤模型,FCM分析成瘤小鼠瘤体细胞CD28分子的表达;将CD28-T与Jurkat分别经SQA-11预处理后再行建立肿瘤模型,观察成瘤时间和成瘤率,同时与未经抗体处理组进行比较。将肿瘤模型随机分组,采用瘤内注射法将SQA-11分2-3点、隔日一次共4次注入瘤内,抗体用量为50μg /mm3观察肿瘤的消长及荷瘤鼠的生存状态。【结果】MTT检测发现SQA-11能够明显抑制CD28-T和Jurkat细胞的体外增殖。CD28-T细胞于接种第3天即形成肉眼可见的肿瘤结节,且成瘤率为100%(40/40)。Jurkat细胞于接种第14天后陆续形成肉眼可见的肿瘤结节,成瘤率为80%(32/40)。对接种第40天的肿瘤结节中的细胞经FCM进行分析,CD28的阳性率分别为CD28-T 90.4%、Jurkat74.3%。与未接种前体外培养的细胞无明显差异。CD28-T与Jurkat细胞分别经SQA-11共孵育后接种小鼠,CD28-T的成瘤时间推迟2天即第5天形成肉眼可见的肿瘤结节,成瘤率仍为100%(20/20);Jurkat细胞的成瘤时间推迟5天即第19天开始形成肿瘤结节,成瘤率为50%(10/20)。将CD28-T(第7天)及Jurkat(第30天)肿瘤模型用SQA-11瘤内注射,观察40天。Jurkat模型组部分(3/10)裸鼠的肿瘤结节变小,平均体积由注射时的56mm3减为32mm3;对CD28-T模型组肿瘤结节的生长无抑制作用。【结论】SQA-11对天然表达CD28分子的人肿瘤具有一定的抑制作用;而对表达外源CD28分子的小鼠肿瘤无明显影响。

全文目录

摘要  4-7
Abstract  7-11
研究背景  11-18
第一部分抗人 CD28 分子单克隆抗体的制备及鉴定  18-25
  1 材料  18-19
  2 实验方法  19-20
  3.结果  20-23
  4 讨论  23
  参考文献  23-25
第二部分 SQA-11 与肿瘤细胞膜型 CD28 结合后介导的效应研究  25-32
  1 材料  25-26
  2 实验方法  26-27
  3 结果  27-30
  4 讨论  30-31
  参考文献  31-32
全文总结  32-33
综述  33-41
  参考文献  38-41
硕士研究生期间发表的论文  41-42
缩写词表  42-43
致谢  43-45

Cd28抗体与抗原结合的特性及介导的效应研究

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