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蝙蝠蛾拟青霉多糖的结构及活性研究

作　者: 曾世明
导　师: 张丽萍
学　校: 东北师范大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 蝙蝠蛾拟青霉 多糖结构 免疫活性 抗肿瘤活性
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


本论文采用水煮、醇沉的方法,得到蝙蝠蛾拟青霉粗多糖CPHP,CPHP经冻融分级、酶-Sevag法联合脱蛋白、Sepharose CL-6B柱层析和HPLC制备等方法进行纯化,得到PHP,PHP经HPLC分析,为均一组分多糖,分子量为28 kDa。GC分析表明,PHP主要由Man、Gal、Glc和Rha四种单糖组成,其摩尔比为13.36:8.18:3.59:1。PHP经部分酸水解反应发现,PHP的主链由Man和Gal两种单糖组成,糖链末端或支链主要由Glc、Gal和少量Rha组成。高碘酸氧化及Smith降解结果表明,1→、1→6键型是PHP的主要连接键型,同时还存在1→、1→2、1→2,6、1→4、1→4,6键型。PHP甲基化分析结果表明,PHP中共存在6种键型,其中Man检出1→2、1→2,6两种键型;Gal检出1→和1→6两种键型;Glc检出1→6键型;Rha检出1→2键型,除Rha外,检出的键型都能被高碘酸氧化,与高碘酸氧化结果一致。经计算,四种单糖的摩尔比为Man:Gal:Glc:Rha = 15.26:9.10:3.63:1,与气象色谱结果基本一致。CPHP对淋巴细胞的增殖及转化的影响结果表明,CPHP在100-400μg/ml浓度下,均能促进淋巴细胞的增殖,并且随着浓度的增加,促进作用越明显;在100-200μg/ml时,CPHP可以促进ConA诱导的T淋巴细胞的增殖,而对LPS诱导的B淋巴细胞的增殖无明显影响。CPHP对S180肉瘤的抑制作用结果:PHP在50、100、200 mg/kg浓度下的抑瘤率分别为0.32±0.15、0.44±0.18、0.34±0.24,而环磷酰胺阳性组的抑瘤率为0.75±0.10,该结果表明,PHP对S180肉瘤具有抑制作用,但抑制作用不如阳性药物环磷酰胺;与此同时,100 mg/kg CPHP给药组小鼠的脾指数显著高于阴性对照组(p<0.05),而CPHP给药组小鼠的胸腺指数显著低于生理盐水组;ELISA法检测血清中TNF-α水平结果表明,与阴性对照相比,CPHP在100 mg/kg和200 mg/kg给药后,荷瘤小鼠血清中的TNF-α水平明显增加,并且随着给药浓度的增加,血清中TNF-α水平越高。说明CPHP可以促进S180荷瘤小鼠TNF-α的生成。

全文目录


中文摘要  4-5
Abstract  5-9
第1章 引言  9-19
  1.1 多糖结构研究进展  9-13
    1.1.1 多糖一级结构分析  9-12
    1.1.2 多糖高级结构的研究方法  12-13
  1.2 多糖活性研究进展  13-16
    1.2.1 多糖的抗肿瘤活性  13
    1.2.2 抗病毒  13
    1.2.3 抗氧化  13-14
    1.2.4 抗衰老  14
    1.2.5 免疫调节作用  14-15
    1.2.6 抗突变作用  15
    1.2.7 抗辐射  15
    1.2.8 抗炎症  15
    1.2.9 抗凝血  15-16
    1.2.10 降血糖  16
    1.2.11 降血脂  16
  1.3 蝙蝠蛾拟青霉的研究现状  16-18
    1.3.1 蝙蝠蛾拟青霉种系研究进展  16-17
    1.3.2 蝙蝠蛾拟青霉发酵工艺研究进展  17
    1.3.3 虫草多糖结构研究进展  17-18
    1.3.4 蝙蝠蛾拟青霉活性研究进展  18
  1.4 本论文选题的依据和意义  18-19
第2章 蝙蝠蛾拟青霉多糖的提取和纯化  19-24
  2.1 实验材料、试剂与仪器  19
    2.1.1 实验材料  19
    2.1.2 试剂  19
    2.1.3 仪器  19
  2.2 实验方法  19-21
    2.2.1 蝙蝠蛾拟青霉水溶性多糖的提取  19-20
    2.2.2 蝙蝠蛾拟青霉多糖的纯化  20
    2.2.3 Sepharose CL-6B 凝胶柱层析制备单一级份多糖  20
    2.2.4 蝙蝠蛾拟青霉多糖理化性质的研究  20-21
  2.3 结果  21-23
    2.3.1 蝙蝠蛾拟青霉水溶性多糖的提取  21
    2.3.2 CPHP 的级性分布与分级纯化  21-22
    2.3.3 CPHP 的理化性质  22-23
    2.3.4 PHP 的理化性质  23
  2.4 本章小结  23-24
第3章 蝙蝠蛾拟青霉水溶性多糖结构研究  24-39
  3.1 实验材料、试剂与仪器  24
    3.1.1 实验材料  24
    3.1.2 试剂  24
    3.1.3 仪器  24
  3.2 实验方法  24-25
    3.2.1 红外光谱分析  24
    3.2.2 部分酸水解  24
    3.2.3 高碘酸氧化和Smith 降解  24-25
    3.2.4 甲基化分析  25
  3.3 结果  25-38
    3.3.1 红外光谱分析  25-26
    3.3.2 部分酸水解  26-28
    3.3.3 高碘酸氧化和Smith 降解  28-31
    3.3.4 甲基化分析  31-38
  3.4 本章小结  38-39
第4章 蝙蝠蛾拟青霉水溶性多糖生物活性测定  39-45
  4.1 实验材料、试剂与仪器  39
    4.1.1 实验材料  39
    4.1.2 试剂  39
    4.1.3 仪器  39
  4.2 实验方法  39-40
    4.2.1 蝙蝠蛾拟青霉水溶性多糖对淋巴细胞体外增殖的影响  39-40
    4.2.2 蝙蝠蛾拟青霉水溶性多糖对小鼠S180 肉瘤抑制作用  40
  4.3 结果  40-44
    4.3.1 CPHP 对淋巴细胞增殖及转化的影响  40-43
    4.3.2 蝙蝠蛾拟青霉水溶性多糖对小鼠S180 肉瘤抑制作用  43-44
  4.4 本章小结  44-45
参考文献  45-49
致谢  49

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药化学
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