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⁶⁰Coγ射线照射对人淋巴母细胞CDKN1A、FABP4和HSL表达的影响

作　者: 朱昊
导　师: 王国卿
学　校: 苏州大学
专　业: 生理学
关键词: 人淋巴母细胞 CDKN1A基因 FABP4蛋白 HSL蛋白电离辐射实时定量RT-PCR Western Blot 脂代谢
分类号: R144
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

电离辐射可以诱导一系列生物学事件的发生,对电离辐射敏感的基因、蛋白可能作为电离辐射生物分子标志物,用于估算机体受照剂量和放射医学辐照防护。细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂1A（CDKN1A）基因对细胞周期的调控有着重要的作用;脂肪酸结合蛋白4（FABP4）以及激素敏感性脂肪酶（HSL）与脂代谢紊乱、炎症反应、动脉粥样硬化等密切相关。已有报道结合本课题预实验表明,上述基因或蛋白属于电离辐射敏感性分子,但这些基因或蛋白的表达与电离辐射的剂量、所在细胞的培养时间之间有着怎样的关系,至今不很明确,这些正是本文所要探讨的内容。目的:探讨各剂量γ射线照射对人淋巴母细胞在不同培养时间内CDKN1A基因mRNA、FABP4和HSL蛋白表达的影响。方法:1.用不同剂量（0 Gy、0.2 Gy、1 Gy、3 Gy、5 Gy、10 Gy）的⁶⁰Coγ射线照射正常人淋巴母细胞（AHH-1细胞）,在不同维持存活培养时间（0 h、4 h、24 h、48 h、72 h、96 h）内收集细胞,抽提总RNA,用Real-time PCR检测细胞中CDKN1A基因mRNA表达水平,观察其随辐照剂量和培养时间的变化。2.用不同低剂量（0 Gy、0.1 Gy、0.5 Gy、1 Gy）的⁶⁰Coγ射线照射正常人淋巴母细胞（AHH-1）,在不同维持存活培养时间（0 h、24 h、48 h、72 h）内收集细胞,抽提总RNA和总蛋白,用Real-time PCR检测细胞中FABP4基因mRNA表达水平,用Western Blot检测细胞中FABP4蛋白和HSL蛋白的表达水平。结果:1. AHH-1细胞中CDKN1A基因mRNA的表达水平随辐照剂量的加大而增加,在0 Gy¹0 Gy之间具有一定剂量依赖性关系（P<0.05）,辐照后培养24 h时基因表达达到峰值,以后呈现下降趋势。2.不同剂量照射后细胞培养24 h、48 h,与对照0 Gy组相比,淋巴母细胞株FABP4 mRNA表达水平随剂量变化呈现波动变化,0.1 Gy组下调,0.5 Gy组和1 Gy组上调;照射后培养72 h,FABP4 mRNA表达在不同剂量点均上调,其中,0.1 Gy和1 Gy时显著上调;γ射线照射后培养72 h,各剂量组淋巴母细胞株FABP4基因表达变化倍数比其他时间点变化倍数大。3.淋巴母细胞随照射剂量的增加在照射后培养0 h时、24 h时和48 h时,FABP4蛋白相对表达量均没有明显差异变化;照射后培养72 h时,FABP4蛋白在1 Gy相对0 Gy表达变化在2倍以上（上调）。4.淋巴母细胞随照射剂量的增加在照射后培养0 h时和24 h时,HSL蛋白相对表达水平没有明显差异;照射后培养48 h时,HSL蛋白0.5 Gy时相对0 Gy的表达变化在2倍以上（上调）,其余剂量组与未照射组相比没有明显差异;照射后培养72 h时,HSL蛋白1 Gy时相对0 Gy的表达变化在2倍以上（下调）,其余剂量组与未照射组相比没有明显差异。5.不同剂量及不同细胞培养时间点的FABP4、HSL蛋白的相对表达量变化,与未照射0 Gy组相比,在照射后培养24 h时、48 h时和72 h时,随照射剂量的增加和培养时间的延长,FABP4蛋白表达水平趋势与HSL蛋白表达的趋势相反。结论:1.γ射线照射人AHH-1细胞,导致CDKN1A基因转录水平在0 Gy¹0 Gy之间具有一定剂量依赖性关系,在辐照后培养24 h内随辐射剂量增加而升高。该基因可能适用于电离辐射剂量的估算。2.不同低剂量γ射线照射人AHH-1细胞后培养72 h,FABP4转录水平及蛋白水平的表达在不同剂量点明显上调。3.不同低剂量γ射线照射人AHH-1细胞,在照射后培养24 h至72 h时,随照射剂量的增加和培养时间的延长,FABP4蛋白表达水平趋势与HSL蛋白表达的趋势相反。4.一次性低剂量γ射线辐照可能对淋巴母细胞脂代谢在分子水平上有一定影响。

全文目录

中文摘要  4-7
Abstract  7-11
引言  11-14
第一部分 ~(60)Coγ射线照射正常人淋巴母细胞诱导CDKN1A基因mRNA表达水平的变化  14-23
  一、实验材料与方法一  14-17
  二、实验结果一  17-20
  三、讨论一  20-23
第二部分 ~(60)Coγ射线照射对脂代谢相关蛋白的影响  23-33
  二、实验材料与方法二  23-26
  二、实验结果二  26-31
  三、讨论二  31-33
结论  33-34
参考文献  34-38
攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文  38-39
中英文词语对照及缩略词表  39-40
综述  40-54
  参考文献  48-54
致谢  54-55

60Coγ射线照射对人淋巴母细胞CDKN1A、FABP4和HSL表达的影响

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