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白藜芦醇抗动脉粥样硬化作用分子机制的研究

作　者: 沈阳辉
导　师: 朱鹏立
学　校: 福建医科大学
专　业: 老年医学
关键词: 白藜芦醇动脉粥样硬化单核细胞趋化蛋白-1 基质金属蛋白酶活性氧簇 CD40
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

背景:白藜芦醇(Res)是红葡萄酒中具有心血管保护作用的最重要的物质,可通过其强大的抗炎作用发挥抗动脉粥样硬化作用。CD40途径参与了动脉粥样硬化(AS)中主要细胞成分的炎症反应调节,在动脉粥样硬化的各个阶段均发挥着重要作用。目的:研究白藜芦醇对单核细胞趋化相关分子的影响、抗氧化、稳定粥样斑块的作用及其与CD40途径的关系,探讨白藜芦醇抗动脉粥样硬化分子作用机制。方法:将体外培养的单核细胞(THP-1)随即分为:空白组、1μmol/LRes组、10μmol/LRes组、50μmol/LRes组,Res孵育24h后,半定量RT-PCR方法检测单核细胞趋化蛋白受体2(CCR2)基因的表达。用佛波酯醇(PMA)诱导THP-1分化为巨噬细胞(Mφ)。利用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、sCD40L活化体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和巨噬细胞将体外培养的HUVEC和Mφ随机分为五组:空白组、TNF-α(10μg/L)组、TNF-α(10μg/L)+(1μmol/L、10μmol/L、50μmol/L)Res组或sCD40L(10μg/ml)组、sCD40L(10μg/ml)+(1μmol/L、10μmol/L、50μmol/L)Res组。药物处理组实验顺序为Res预孵育2h后,加入TNF-α或sCD40L刺激细胞,半定量RT-PCR方法检测Mφ内基质金属蛋白酶-9/组织基质金属蛋白酶抑制因子-1(MMP-9/TIMP-1)基因的转录水平,Western Blot、明胶酶谱法检测MMP-9/ TIMP-1蛋白表达水平和酶活性,ELISA测HUVEC单核细胞趋化蛋白(MCP-1)的分泌,免疫荧光法检测HUVEC内活性氧簇(ROS)的表达。结果:白藜芦醇(10μmol/L、50μmol/L)可以剂量依赖地减少单核细胞CCR2基因的表达(P<0.01)。TNF-α和sCD40L均可刺激HUVEC MCP-1分泌和ROS表达增加(P<0.05),而白藜芦醇(10μmol/L、50μmol/L)可抑制TNF-α和sCD40L活化HUVEC MCP-1的分泌(P<0.05)和细胞内ROS的产生(P<0.01)。PMA诱导THP-1分化为巨噬细胞后,巨噬细胞内MMP-9/TIMP-1基因转录、蛋白分泌明显增加(P<0.01),白藜芦醇(10μmol/L、50μmol/L)可以并且以剂量依赖的方式抑制sCD40L刺激巨噬细胞MMP-9基因、蛋白的表达(P<0.01),降低MMP-9酶活性(P<0.05);并能够逐渐升高巨噬细胞TIMP-1基因的转录(P<0.05)和蛋白分泌(P<0.05)。结论:白藜芦醇可抑制单核细胞CCR2基因的表达和减少TNF-α或sCD40L诱导的HUVEC MCP-1的分泌,抑制对单核细胞的趋化;还可抑制活化的HUVEC内ROS的产生,减少内皮氧化损伤。白藜芦醇可以通过CD40途径抑制巨噬细胞内MMP-9的表达,并通过刺激TIMP-1的表达调节MMP-9的活性。提示白藜芦醇可通过阻断CD40途径而抑制AS早期的炎症反应,具有保护血管内皮和稳定粥样斑块的作用。

全文目录

中英文简写对照  4-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
前言  10-14
第一部分白藜芦醇对人单核细胞趋化相关分子和内皮细胞内ROS 的影响  14-29
  材料  14-15
  方法  15-20
  结果  20-25
  讨论  25-29
第二部分白藜芦醇对巨噬细胞MMP-9/TIMP-1的影响作用  29-45
  材料  29-30
  方法  30-34
  结果  34-41
  讨论  41-45
总结  45-46
参考文献  46-52
致谢  52-53
综述  53-59

白藜芦醇抗动脉粥样硬化作用分子机制的研究

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