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植物源抗病毒物质WCT-Ⅱ作用机理及应用研究

作　者: 车海彦
导　师: 吴云锋
学　校: 西北农林科技大学
专　业: 植物病理学
关键词: WCT-Ⅱ 烟草花叶病毒西瓜花叶病毒2号酶活性病程相关蛋白
分类号: S432
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
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内容摘要

本实验利用萃取，重结晶的方法从植物中提取出一种天然抗病毒物质，命名为WCT-Ⅱ。并对该物质的部分理化性质进行了测定，以烟草和烟草花叶病毒(TMV)组成的系统及西葫芦和西瓜花叶病毒2号(WWMV-2)组成的系统为研究对象，测定了WCT-Ⅱ的室内生物学防效，并对其抗病毒机制进行了深入研究。 WCT-Ⅱ纯晶是一种橘红色结晶，可溶于丙酮、乙醚和正丁醇，微溶于氯仿和乙醇，不溶于水和石油醚。红外、质谱及核磁共振图谱的分析确定该化合物为：Lanost-8-en-26-oic,3-alpha，12-alpha,-dihydroxy-24-methylene-，methylester。药效实验表明，该物质对病毒病害有较好的防治效果。烟草在喷施浓度为120ppm时防效可以达到73.6％，西葫芦在喷施浓度为100ppm时防效可以达到52.6％。直接用WCT-Ⅱ处理病毒，采用枯斑半叶法和电镜检测发现，处理后的病毒致病力明显下降，病毒粒体大量发生断裂。 WCT-Ⅱ处理后，植物体内发生了一系列的生理生化变化。与对照相比，处理叶片叶绿素含量明显提高，表现为花叶症状减轻；过氧化氢酶活性明显受到抑制。烟草和西葫芦叶片匀浆和胞间液的几丁质酶和β-1，3—葡聚糖酶和对照相比，酶活性都明显增加；对叶片匀浆和胞间液的蛋白经SDS-PAGE不连续电泳发现，处理后的烟草叶片胞间在第5—9天和第7天分别存在1条酸溶性蛋白和1条碱溶性蛋白；西葫芦叶片匀浆中在第3-9天存在1条特异酸溶性蛋白条带。上述结果说明，WCT-Ⅱ具有诱导植物产生抗病性的能力。 WCT-Ⅱ作为一种天然的抗病毒物质，对植物病毒病的防治是多方面作用的综合结果。它的防病机理主要表现在体外钝化病毒，诱导植物产生抗病性(提高叶绿素含量、抑制过氧化氢酶活性、提高几丁质酶和β-1，3葡聚糖酶活性、诱导产生PR(蛋白)等方面。该物质具有生物活性高，对动植物无毒，安全性高的特点，相信会有较好的应用前景。

全文目录

中文摘要  4-5
英文摘要  5-6
目录  6-8
1 文献综述  8-22
  1.1 天然抗植物病毒物质  8-14
    1.1.1 植物中的抗病毒物质  8-10
    1.1.2 微生物中的抗病毒物质  10-11
    1.1.3 海洋生物中的抗病毒物质  11-13
    1.1.4 其它抗病毒活性物质  13-14
  1.2 目前国内生产上使用的抗病毒农药种类、使用情况与存在的问题  14-17
  1.3 抗病毒物质的作用机理  17-19
    1.3.1 抑制侵染  17
    1.3.2 抑制病毒增殖  17-18
    1.3.3 诱导寄主产生抗病性  18-19
    1.3.4 促进植株生长  19
  1.4 新技术与新方法在抗病毒药物研究中的应用  19-20
    1.4.1 近年来新出现的提取和分析技术在抗病毒药物研究中的应用  19
    1.4.2 生物技术在抗病毒农药研究中的应用  19-20
  1.5 天然产物利用过程中存在的问题与展望  20-22
2 材料与方法  22-30
  2.1 材料  22
    2.1.1 供试毒源  22
    2.1.2 供试植物  22
  2.2 方法  22-30
    2.2.1 WCT-Ⅱ纯品制备  22
    2.2.2 WCT-Ⅱ的结构鉴定  22
    2.2.3 WCT-Ⅱ的毒力测定  22-23
    2.2.4 WCT-Ⅱ对TMV的体外钝化作用  23
    2.2.5 WCT-Ⅱ对体外TMV粒体形态的影响  23-24
    2.2.6 WCT-Ⅱ对烟草和西葫芦叶片中叶绿素含量的影响  24
    2.2.7 WCT-Ⅱ对植物过氧化氢酶活性的影响  24-25
    2.2.8 几丁质酶和β-1，3-葡聚糖酶活性的测定  25-27
    2.2.9 WCT-Ⅱ对西葫芦和烟草体内病程相关蛋白的诱导作用  27-30
3 结果与分析  30-41
  3.1 WCT-Ⅱ纯品的结构鉴定  30
  3.2 WCT-Ⅱ的毒力测定  30-31
    3.2.1 WCT-Ⅱ对由TMV引起的烟草病毒病的毒力测定结果  30-31
    3.2.2 WCT-Ⅱ对由WMV-2引起的西葫芦病毒病的毒力测定结果  31
  3.3 WCT-Ⅱ对TMV的体外钝化作用  31
  3.4 WCT-Ⅱ对体外TMV粒体形态的影响  31-32
  3.5 WCT-Ⅱ对烟草和西葫芦叶片中叶绿素含量的影响  32-33
    3.5.1 烟草叶片中叶绿素含量变化  32
    3.5.2 西葫芦叶片中叶绿素含量变化  32-33
    3.5.3 小结  33
  3.6 WCT-Ⅱ对烟草和西葫芦叶片中过氧化氢酶活性的影响  33-34
    3.6.1 烟草叶片中过氧化氢酶活性变化  33
    3.6.2 西葫芦叶片中过氧化氢酶活性变化  33-34
    3.6.3 小结  34
  3.7 WCT-Ⅱ对烟草和西葫芦叶片中几丁质酶和β-1，3-葡聚糖酶活性的影响  34-38
    3.7.1 胞间液提取时适宜离心时间的确定  34
    3.7.2 WCT-Ⅱ对烟草叶片中几丁质酶和β-1，3-葡聚糖酶活性影响  34-36
    3.7.3 WCT-Ⅱ对西葫芦叶片内几丁质酶和β-1，3-葡聚糖酶活性的影响  36-37
    3.7.4 小结  37-38
  3.8 WCT-Ⅱ对西葫芦和烟草体内病程相关蛋白的诱导作用  38-41
    3.8.1 烟草叶片中蛋白的电泳结果分析  38
    3.8.2 西葫芦叶片蛋白的电泳结果分析  38-40
    3.8.3 小结  40-41
4 讨论  41-43
  4.1 WCT-Ⅱ对TMV的体外钝化作用  41
  4.2 几丁质酶和β-1，3-葡聚糖酶活性变化与植物抗病性关系  41
  4.3 病程相关蛋白与植物抗病性关系  41-42
  4.4 展望  42-43
5 结论  43-44
6 附图  44-52
参考文献  52-61
附件  61-62
致谢  62

植物源抗病毒物质WCT-Ⅱ作用机理及应用研究

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