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北疆葫芦科作物Potyvirus属病毒种类的分子鉴定与遗传分化研究

作　者: 刘卫荣
导　师: 向本春
学　校: 石河子大学
专　业: 植物病理学
关键词: 瓜类作物 小西葫芦黄化花叶病毒(ZYMV) 西瓜花叶病毒2号(WMV-2) 番木瓜环斑病毒(PRSV) RT-PCR
分类号: S432.41
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要


瓜类作物是新疆重要的经济作物之一。近年来,病毒病的发生和危害直接威胁着新疆瓜类作物的生产和发展。随着品种的更新引用,发生在瓜类作物上的病毒病种类越来越多,病毒的致病性多种多样,引起的瓜类症状类型更加复杂,给瓜类作物的产量和质量造成了严重的损失。对此,本论文对侵染北疆瓜类作物上的马铃薯Y病毒属(Potyvirus)病毒种类进行了初步的鉴定和研究。近年来,国内已报道的发生在瓜类作物上的Potyvirus病毒属中的西瓜花叶病毒2号(WMV-2),小西葫芦黄化花叶病毒(ZYMV)及番木瓜环斑病毒西瓜株系(PRSV-W)危害最为严重(原先的WMV-1经过长久研究证明其实是番木瓜环斑病毒的一个株系PRSV-W)。从昌吉、石河子等地采集到多种带病的瓜类作物样品,根据已报道的WMV-2、ZYMV、PRSV基因序列设计引物,采用RT-PCR的方法,扩增外壳蛋白(CP)基因的cDNA片段,将其克隆到Vector pMD18-T载体上并进行测序和序列分析。结果表明:从石河子地区采集到的丝瓜、甜瓜及黄瓜上分离获得的五个ZYMV片段的cDNA全长1185bp,其中包括CP基因长837个核苷酸编码的279个氨基酸,及NIb区域135个核苷酸,编码的45个氨基酸,与国内外已报道的7个ZYMV序列比对,其核苷酸其同源性高达94.44%,氨基酸序列同源性高达97.48%,由此从分子水平证明了该病毒为ZYMV;从昌吉地区的南瓜上获得的WMV-2片段cDNA全长917bp,该分离物CP基因全长为850个核苷酸,编码了197个氨基酸,与国内外已报道的12个WMV-2 CP基因相比,其核苷酸序列同源性为93.6%～97.5%,由此推导的氨基酸序列同源性为94.9%～98.9%,分离物在N端可变区明显不同于国内外报道的核苷酸序列,和日本、郑州分离物较其它国家地区的分离物多出6个核苷酸,但其核苷酸及其推导的氨基酸序列差异较大,再则,该分离物外壳蛋白有2个氨基酸残基明显不同于其它分离物,其中蚜传株系的特征结构域DAG突变为DAE。

全文目录


摘要  5-6
Abstract  6-11
第一章 文献综述  11-18
  1.1 瓜类病毒病发生概况  11-12
  1.2 瓜类上发生的马铃薯Y 病毒属（Potyvirus）病毒研究概况  12-15
    1.2.1 小西葫芦黄化花叶病毒（Zucchini yellow mosaic virus，ZYMV）生物学特性及危害  13-14
    1.2.2 西瓜花叶病毒2 号（Watermelon mosaic virus 2，WMV-2）生物学特性及危害  14-15
    1.2.3 番木瓜环斑病毒（Papaya ringspot virus,PRSV）生物学特性及危害  15
  1.3 病毒检测技术在瓜类病毒研究中的应用  15-18
    1.3.1 电镜观察  15-16
    1.3.2 血清学反应  16
    1.3.3 内含体鉴定  16
    1.3.4 衣壳蛋白鉴定  16-17
    1.3.5 核酸杂交和核酸序列分析  17
    1.3.6 PCR 检测  17-18
第二章 材料与方法  18-24
  2.1 材料  18-19
    2.1.1 毒源  18
    2.1.2 菌株  18
    2.1.3 引物  18
    2.1.4 试剂及酶类  18-19
    2.1.5 主要仪器  19
    2.1.6 培养基及重要溶液的配置  19
  2.2 方法  19-24
    2.2.1 RT-PCR 检测分析  19-21
    2.2.2 病毒衣壳蛋白全长cDNA 的克隆与序列分析  21-24
第三章 结果与分析  24-37
  3.1 ZYMV 新疆石河子分离物  24-29
    3.1.1 ZYMV 新疆石河子分离物的RT-PCR 鉴定  24
    3.1.2 ZYMV 新疆石河子分离物CP 基因的克隆和重组  24-25
    3.1.3 ZYMV 新疆石河子分离物核苷酸序列及氨基酸的同源性分析  25-29
  3.2 WMV-2 新疆昌吉分离物  29-37
    3.2.1 WMV-2 新疆分离物的获得  29-30
    3.2.2 WMV-2 新疆昌吉分离物的RT-PCR 鉴定  30
    3.2.3 WMV-2 新疆昌吉分离物CP 基因的克隆和重组  30-31
    3.2.4 WMV-2 新疆昌吉分离物核苷酸序列及氨基酸的同源性分析  31-37
第四章 结论与讨论  37-39
  4.1 从北疆瓜类病毒病样品中，分离鉴定出ZYMV 和WMV-2  37
  4.2 ZYMV 新疆石河子分离物的病毒外壳蛋白基因的遗传变异分析  37-38
  4.3 WMV-2 新疆昌吉分离物的病毒外壳蛋白基因的遗传变异分析  38
  4.4 WMV-2 新疆昌吉分离物是否可以蚜传有待于进一步证实  38-39
参考文献  39-43
致谢  43-44
作者简历  44-45
导师评语  45

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中图分类: > 农业科学 > 植物保护 > 病虫害及其防治 > 植物病害及其防治 > 侵（传）染性病害 > 病毒
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