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交变磁场下磁纳米载体介导的重组pEGFP-AFP-TK对裸鼠移植性肝癌细胞杀伤作用的研究

作　者: 唐琦
导　师: 彭健
学　校: 中南大学
专　业: 生物医学工程
关键词: HepG2肝癌动物模型 交变磁场 PEG-PEI/Fe3O4纳米磁流体 pEGFP-AFP-TK AFP
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


目的：在前期实验证实纳米磁流体作为基因载体具有较高的转染效率的基础上,利用前期准备好的PEG-PEI/Fe3O4纳米磁流体和含有AFP启动子的自杀基因pEGFP-AFP-TK质粒,建立裸鼠移植性肝癌模型,在外加交变磁场的条件下,研究交变磁场对PEG-PEI/Fe3O4纳米磁流体转染pEGFP-AFP-TK自杀基因治疗肝癌的影响。方法：建立人原发性肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,将荷瘤裸鼠随机分成空白对照组、磁场空白组、纯纳米磁流体组、纯pEGFP-AFP-TK自杀基因组和PEG-PEI/Fe3O4纳米磁流体介导的pEGFP-AFP-TK组5组。空白对照组不作任何处理；磁场空白组在磁场照射下不作任何处理；其余实验组分别于裸鼠肿瘤部位直接注射PEG-PEI/Fe3O4纳米磁流体、pEGFP-AFP-TK自杀基因和PEG-PEI/Fe3O4纳米磁流体转染的pEGFP-AFP-TK质粒,同时在裸鼠尾静脉注射更昔洛韦(GCV)。实验中的采用的脉冲磁场发生装置的频率为40kHz,磁场强度峰值为5kA/m,作用时间为15min/d,共15d,观察并记录7d、15d两个时段皮下肿瘤的生长情况并做病理学检查,用免疫组化法检测肿瘤微血管密度(MVD)的表达量,用原位末端标记(TUNEL)法检测细胞原位凋亡,用RT-PCR检测肿瘤鼠心,肝,肾的自杀基因表达情况。结果：裸鼠皮下成瘤率100%。7d和15d的时候,纳米磁流体转染的pEGFP-AFP-TK组的在肿瘤体积、重量、血清中AFP的含量以及肿瘤MVD均低于其他各组；在抑瘤率、细胞凋亡指数则明显高于其他组别；可见在外加交变磁场的作用下,纳米磁流体转染的自杀基因组对移植肝癌细胞的杀伤效果优于磁场空白组、纯纳米磁流体和纯自杀基因组。通过RT-PCR检测肿瘤鼠心、肺,肾部位自杀基因的表达较弱,而肿瘤组织细胞处自杀基因表达明显。结论：在交变磁场作用下,纳米磁流体转染的pEGFP-AFP-TK对移植型肝癌裸鼠模型的肝癌细胞具有明显的杀伤作用。一定强度的外加磁场对肿瘤的生长具有一定的影响,外加磁场可以作为治疗肝癌的一种辅助治疗手段,将局部靶向热疗和靶向基因治疗结合以达到更好的治疗效果。

全文目录


摘要  4-6
Abstract  6-8
目录  8-10
缩略词  10-11
前言  11-14
  1 磁场对细胞的生物学作用  11
  2 磁场结合磁性纳米材料在治疗肿瘤中的应用  11-12
  3 交变磁场下磁纳米颗粒转染自杀基因治疗肝癌的体内试验  12-14
实验流程图  14-15
第一章 材料与方法  15-21
  1.1 材料  15-16
    1.1.1 主要试剂  15
    1.1.2 主要仪器  15-16
  1.2 实验方法  16-21
    1.2.1 PEG-PEI/Fe3O4纳米磁流体的制备  16
    1.2.2 pEGFP-AFP-TK的构建  16
    1.2.3 纳米磁流体转染的pEGFP-AFP-TK复合物的制备  16
    1.2.4 交变磁场实验平台的提供  16-17
    1.2.5 裸鼠肝癌模型的建立  17-18
    1.2.6 检测的指标  18-20
    1.2.7 数据分析及评价  20-21
第二章 结果  21-31
  2.1 肿瘤体积的变化  21-22
  2.2 肿瘤质量的变化及抑瘤率计算  22-23
  2.3 肿瘤微血管密度(MVD)检验  23-24
  2.4 实验前后AFP含量的检验  24-25
  2.5 病理检测  25-27
  2.6 细胞原位凋亡检测  27-30
  2.7 RT-PCR检测TK在肿瘤裸鼠心肺肾和肿瘤部位的分布  30-31
第三章 讨沦  31-35
  3.1 强脉冲磁场对肿瘤细胞的作用  31
  3.2 交变磁场的靶向局部热疗  31-32
  3.3 交变磁场下自杀基因的靶向治疗  32-35
第四章 结论  35-36
参考文献  36-39
附录  39-53
  附录1  39-44
  附录2  44-51
  参考文献  51-53
致谢  53-54
发表论文  54
参与研究项目  54

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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