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老年性耳聋患者内皮祖细胞功能研究

作　者: 王蕾
导　师: 赵玉林
学　校: 郑州大学
专　业: 耳鼻咽喉科学
关键词: 老年性耳聋内皮祖细胞细胞集落细胞粘附细胞增殖细胞迁移
分类号: R764
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

背景和目的耳聋是影响人类生活质量和导致终生残疾的主要问题之一。估计全球听力受损人数大约有2.78亿人,其中2／3在发展中国家。听力损害不仅对患者影响巨大,而且已成为一项严重的社会问题,成年的听力损害已是全球十大致残原因之一超过50%的65岁以上老年人均有听力损害。我国为发展中国家,且随着社会经济发展,社会老龄化越来越严重。老年性耳聋是伴随年龄老化(一般发生在60岁以上)而发生的听觉系统退行性变导致的耳聋。其原因与耳部微血管退化、耳蜗病变以及全身机能退化密切相关。老年性耳聋耳部微血管退化,这可能和耳部微血管损伤修复和再生能力较差有关。在血管损伤的修复和再生中内皮祖细胞(endothelial progenitor cells, EPCs)起着重要的作用。EPCs表达多种内皮标志,并可以整合到缺血区域的新生血管中。研究表明某些生理条件、疾患和药物等多种因素均能对内皮祖细胞的动员、迁移、定居、整合和分化等功能产生明确的影响。机体的衰老、吸烟等不良嗜好、缺乏体育运动、心肌梗死、高血压病、心绞痛、脑梗死、Ⅰ型和Ⅱ型糖尿病等均可导致EPCs数目减少,功能下降。老年性耳聋患者内皮祖细胞功能如何变化,目前还鲜见报导。我们对老年性耳聋患者外周血循环中的EPCs功能进行研究,并与年龄相匹配的健康老年人外周血循环中的EPCs功能对比,以探讨老年性耳聋患者EPCs的功能变化,并进一步探讨老年性耳聋发生的可能机理。材料和方法1.病人资料和分组老年性耳聋病人16例,其中女7例,男9例,年龄60-69岁,平均64.7岁。发现耳聋病史9个月至2年3月,耳聋分级为中度的患者,其语频听阈在41～55dB。排除可能对EPCs有影响的药物应用史和其他近期疾病史。对照组健康老年人为体检者16例,其中女7例,男9例,年龄60-68岁,平均65.5岁。2.外周血内皮祖细胞的分离、培养取研究对象外周静脉血空腹10ml,用人淋巴细胞分离液进行密度梯度离心法获得单个核细胞,并在M199培养基中培养(含20%胎牛血清和生长因子)。培养第7天多波长激光共聚焦显微镜鉴定,FITC-UEA-Ⅰ和Dil-acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPCs。3.内皮祖细胞集落和细胞计数、粘附、增殖、迁移能力检测第7天计数两组EPC集落和细胞数目,然后消化、收集部分培养的EPCs分别进行下列实验。粘附能力测定：细胞接种密度为1×105个／ml,接种到预先人纤维连接蛋白(1ng/μ1)包被的培养板中培养30min,计数贴壁细胞。增殖能力测定：细胞密度为2×103个／ml,用MTT细胞增殖及细胞毒性试剂盒测定EPCs的增殖能力。迁移能力：细胞密度为2×104个／ml,采用改良的Boyden小室法培养24小时,计数迁移到小室下层的细胞数。结果老年性耳聋患者外周血内皮祖细胞体外培养EPCs集落计数为1.40±0.37；EPCs计数为54.32±9.24；粘附细胞计数为17.32±5.18；EPCs吸光度为0.154±0.042；迁移到Boyden小室底层的EPCs数目为11.18±2.73。对照组外周血内皮祖细胞体外培养EPCs集落计数为2.88±0.48；EPCs计数为67.64±8.39；粘附细胞计数为22.58±5.46；EPCs吸光度为0.226±0.574；迁移到Boyden小室底层的EPCs数目为15.72±3.43。与对照组相比,老年性耳聋患者组EPCs集落和细胞计数、粘附能力、增殖能力、迁移能力均下降,具有显著性统计学差异(P<0.05)。结论老年性耳聋患者外周血内皮祖细胞体外培养细胞计数、粘附、增殖、迁移能力下降；内皮祖细胞功能下降可能为老年性耳聋的发病机理之一。

全文目录

摘要  3-5
Abstract  5-9
论文部分老年性耳聋患者内皮祖细胞功能研究  9-32
  前言  9-10
  1. 材料和方法  10-13
  2. 实验方法  13-17
  3. 实验结果  17-20
  4. 讨论  20-25
  结论  25-26
  附图  26-27
  参考文献  27-32
综述部分内皮祖细胞—老年性耳聋研究新思路?  32-54
  参考文献  42-54
附录部分  54-55
  在读硕士期间发表论文  54-55
  致谢  55

老年性耳聋患者内皮祖细胞功能研究

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