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吉西他滨对慢粒细胞G-CSFR及bcr/abl mRNA的影响

作　者: 刘丹
导　师: 孙玲
学　校: 郑州大学
专　业: 血液内科
关键词: 吉西他滨 粒细胞集落刺激因子受体 慢性粒细胞白血病 bcr/abl融合基因
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的:随着分子生物学的发展,核苷类抗代谢物已经成为抗肿瘤药物研究的重要内容。吉西他滨(Gemcitabine,GEM)是一种新型的脱氧胞苷类似物和核苷还原酶抑制剂,属抗代谢类抗肿瘤药物,目前已被广泛应用于实体瘤的治疗,因其疗效肯定,副作用小已被美国FDA批准为非小细胞肺癌、乳腺癌以及胰腺癌的一线化疗药。国外有关该药物对白血病的治疗尚处于基础研究及临床试验阶段,国内偶见吉西他滨用于难治及复发淋巴瘤的报道,研究表明吉西他滨体外可诱导髓系白血病株HL-60细胞凋亡,抑制HL-60细胞系增殖。粒细胞集落刺激因子(graunlocyte colony-stimulating factor,G-CSF)是一种重要的造血生长因子,它与粒细胞集落刺激因子受体(G-CSF receptor,G-GSFR)结合,通过复杂的信息传导系统,特异地调节粒系细胞的增殖与分化,并增强成熟粒细胞的功能,在机体应激防御系统中起重要作用。73%-79%的造血干细胞及93%的造血祖细胞表面有G-CSFR的存在,且G-CSFR的数量随着细胞的成熟而增加,因此,G-CSFR的表达在某种程度上反映了细胞的分化程度。人类成熟的粒细胞表面有200-1000 R/细胞,而在幼稚细胞表面G-CSFR的数量相对较少,约为正常粒细胞的百分之一。慢性粒细胞白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)病人的BCR/ABL融合基因高表达可以通过下调C/EBPalpha抑制骨髓祖细胞G-CSFR的转录,造成了CML病人骨髓细胞G-CSFR的表达率降低。G-CSFR表达率的下降能影响G-CSF生理效应的发挥,使细胞分化障碍;C/EBPalpha可诱导骨髓前体细胞向粒系分化,它的下调会阻止髓系分化,因此C/EBPalpha的下调和G-CSFR表达率降低可能导致CML患者骨髓粒系分化障碍,这可能是CML慢性期患者进入到急变期的诱因之一。本研究将吉西他滨作用于CML骨髓细胞,观察吉西他滨对CML患者骨髓细胞BCR/ABL融合基因mRNA及骨髓粒系G-CSFR表达的作用,为其可能作为新的CML治疗药物提供实验依据,探讨应用吉西他滨治疗白血病的可能性。方法:1.选择CML慢性期初治患者23例、CML急变期患者8例及正常对照组10例,每例取骨髓液6ml制备骨髓单个核细胞悬液,分为吉西他滨组和未加药组,吉西他滨组加入吉西他滨,调整浓度为10μg/ml,用含体积分数10%胎牛血清的1640培养液培养,置于37℃,5%CO~2饱和湿度的孵箱中培养48h后收集细胞,未加药组接种于含体积分数10%胎牛血清的1640培养液(Gibco公司产品)中,置于37℃,5%CO~2饱和湿度的孵箱中培养48h后收集细胞。2.将收集的细胞进行以下检测:①流式细胞仪检测细胞表面G-CSFR的表达;②逆转录聚合酶链反应检测bcr/abl mRNA的表达。3.所得结果应用SPSS13.0统计学软件处理,统计学数据用均数±标准差((?)±s)表示,多样本均数的比较采用方差分析,以α=0.05为检验水准。G-CSFR表达率用均数±标准差((?)±s,%)表示,同时采用直线相关性检验分析G-CSFR与bcr/abl mRNA表达水平之间有无相关性。结果:1.G-CSFR在各组标本中的表达流式细胞仪检测显示:吉西他滨组CML慢性期、急变期患者骨髓粒系G-CSFR的表达分别为(50.72±8.57)%和(36.32±4.25)%,正常对照组G-CSFR的表达为(59.42±7.62)%;未加药组CML慢性期、急变期患者骨髓粒系G-CSFR的表达分别为(45.42±6.52)%和(32.58±5.68)%,正常对照组G-CSFR的表达为(58.56±5.54)%。吉西他滨组和未加药组CML慢性期、急变期骨髓粒系G-CSFR的表达明显低于正常人(P＜0.05),CML慢性期患者高于急变期(P＜0.05)。吉西他滨组CML慢性期、急变期骨髓细胞G-CSFR的表达率高于未加药组(P＜0.05),该组正常对照组G-CSFR的表达率与未加药组无明显差异(P＞0.05)。2.bcr/abl mRNA在各组标本中的相对表达水平逆转录聚合酶链反应检测结果显示:反应产物经琼脂糖凝胶电泳后凝胶扫描成像系统照相,定性判断目的基因相对参照基因表达量的变化,电泳结果经凝胶扫描成像系统灰度扫描,定量分析目的基因表达量的变化,以bcr/abl/β-actin的比值表示目的基因mRNA的相对表达水平。吉西他滨组CML慢性期、急变期患者bcr/abl mRNA的相对表达水平分别为0.59±0.15和0.60±0.13;未加药组CML慢性期、急变期患者bcr/abl mRNA的相对表达水平分别为0.60±0.10和0.63±0.11。吉西他滨组CML慢性期患者bcr/abl mRNA的相对表达水平明显低于未加药组(P＜0.05),吉西他滨组CML急变期患者bcr/abl mRNA的相对表达水平明显低于未加药组(P＜0.05)。3.G-CSFR与bcr/abl mRNA相对表达水平的相关性分析吉西他滨组与未加药组CML慢性期、急变期G-CSFR的表达率与bcr/abl mRNA的相对表达水平呈负相关(P＜0.05)。结论:1.G-CSFR在CML慢性期、急变期患者中低表达。2.CML慢性期G-CSFR的表达高于急变期。3.在体外培养下吉西他滨可以提高CML慢性期、急变期患者G-CSFR的表达。4.CML慢性期、急变期患者G-CSFR与bcr/abl mRNA的相对表达水平呈负相关。

全文目录


摘要  3-6
Abstract  6-10
论文 吉西他滨对慢粒细胞G-CSFR及bcr/ablmRNA的影响  10-38
  前言  10-11
  材料和方法  11-20
  结果  20-27
  讨论  27-33
  结论  33-34
  参考文献  34-38
综述 粒细胞集落刺激因子受体与恶性血液病  38-51
  参考文献  46-51
英文缩略词索引  51-52
致谢  52

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中图分类: > 医药、卫生 > 药学 > 药理学
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