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淡紫拟青霉固体发酵技术研究

作　者: 黄永兵
导　师: 肖炎农
学　校: 华中农业大学
专　业: 植物病理学
关键词: 淡紫拟青霉固体发酵玉米秆生物防治
分类号: S476.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus)是根结线虫、胞囊线虫等线虫的寄生菌，具有防治植物线虫病害的潜力。本文研究了淡紫拟青霉固体发酵基质、固体发酵工艺和淡紫拟青霉应用。固体发酵基质的初步筛选，首先根据淡紫拟青霉36-1菌株在小麦粉、玉米粉、稻谷粉琼脂培养基上生长差异，确定淡紫拟青霉固体发酵的主要营养物质为玉米粉；以发酵产物孢子含量为指标，兼顾发酵原料成本，筛选出淡紫拟青霉固体发酵比较理想的基本配方：玉米秆：玉米粉为1：1，米糠：玉米粉为1：1(重量比)。淡紫拟青霉36-1固体发酵菌种配方筛选是以发酵产物易分散、不易污染、孢子含量和产孢产量等为指标，确定固体发酵菌种的配方为：米糠／玉米粉／清水=0.3：0.3：0.4(重量比)。菌种配方接种后在25℃条件下发酵10d后，孢子含量为2.29×10~9(个／g湿重)，产孢量为3.12×10~9(个／g投入干料)。淡紫拟青霉36-1固体发酵化生产配方是以成本、孢于含量、产孢产量等为指标。单因子试验表明，水分含量和外加氮源对淡紫拟青霉36-1菌株的生长及发酵产物孢子含量和产量影响比较大生，水分含量为60％比较好，有利于菌丝生长和产孢；外加氮源中以加硫酸铵含量为0.5％左右比较好，可显著提高发酵产物的孢子含量和产孢量；添加蔗糖则影响不大。以玉米秆、米糠、玉米粉、硫酸铵为因子进行正交试验表明，影响发酵产物产孢量大小依次为：硫酸铵＞玉米秆＞米糠＞玉米粉。经不同因子不同水平对产孢量的影响分析与验证，生产配方最终确定为：玉米秆／米糠／玉米粉=0.6／0.4／1.5(重量比)，硫酸铵含量为0.1％，加水含量50.0％。生产配方接种后在25℃条件下发酵10d后，孢子含量为7.29×10~9(个／g湿重)，产孢量为7.77×10~9(个／g投入干料)。淡紫拟青霉固体发酵工艺研究主要是接种量、发酵周期及固体发酵产物室温下贮存时间对孢子萌发的影响。当菌种孢子含量达10~9(个／g湿重)以上时，接种量为1.0％；在温度为25℃，自然湿度条件下，淡紫拟青霉发酵周期为10-12d；室温下贮存时间对孢子萌发影响很大，保存时间2-11个月，孢子萌发率仍保持在90％左右。耐药性测定表明，淡紫拟青霉36-1对多菌灵、百菌清、苯醚甲环唑、丙环唑等很敏感，因此不宜和这些杀菌剂混用，但对常用杀虫剂阿维菌素和辛硫磷不敏感，可以考虑和这些杀虫剂混用，以提高防治线虫的效果。

全文目录

摘要  7-8
Abstract  8-9
第一章文献综述  9-18
  1 植物线虫病害概况及其综合治理  9-11
    1.1 植物线虫的危害  9
    1.2 植物线虫病害的综合治理  9-11
      1.2.1 常用防治方法  9-10
      1.2.2 生物防治  10-11
  2 淡紫拟青霉的研究进展  11-15
    2.1 淡紫拟青霉的生物学特性  11-12
    2.2 淡紫拟青霉防治线虫的机制  12
    2.3 淡紫拟青霉在土壤中的定殖及其对作物生长的影响  12-13
    2.4 淡紫拟青霉的使用  13-14
      2.4.1 使用剂量  13
      2.4.2 使用方法及影响防效因子  13-14
    2.5 淡紫拟青霉的发酵技术  14-15
      2.5.1 固体发酵  14
      2.5.2 液体发酵  14-15
      2.5.3 发酵工艺  15
  3 其它产孢真菌固体发酵  15-16
  4 固体发酵设备的研究  16
  5 研究目的和意义  16
  6 研究内容  16-18
    6.1 淡紫拟青霉固体发酵配方初步筛选  16
    6.2 淡紫拟青霉菌种配方的优化和确定  16
    6.3 淡紫拟青霉生产配方的优化和确定  16-17
    6.4 淡紫拟青霉固体发酵工艺研究  17
    6.5 淡紫拟青霉耐药性测定  17-18
第二章淡紫拟青霉固体发酵配方初步筛选  18-23
  1 材料及方法  18-19
    1.1 供试菌株  18
    1.2 培养基制备  18
    1.3 菌种的制备及用量  18-19
    1.4 培养条件  19
    1.5 菌落扩展测定  19
    1.6 孢子含量测定  19
    1.7 数据统计分析  19
  2 结果与分析  19-22
    2.1 不同琼脂培养基对36-1菌株生长的影响  19-20
    2.2 米糠和玉米粉不同配比对D_(21)菌株生长和产孢的影响  20-21
      2.2.1 米糠和玉米粉不同配比对D_(21)菌株生长的影响  20
      2.2.2 米糠和玉米粉不同配比对D_(21)菌株产孢的影响  20-21
    2.3 玉米秆和玉米粉不同配比对D_(21)菌株生长和产孢的影响  21-22
      2.3.1 玉米秆和玉米粉不同配比对D_(21)菌株生长的影响  21-22
      2.3.2 玉米秆和玉米粉不同配比对D_(21)菌株产孢的影响  22
  3 结论和讨论  22-23
第三章淡紫拟青霉菌种配方的优化和确定  23-26
  1 材料和方法  23
    1.1 固体发酵菌种的制备及用量  23
    1.2 不同加水含量菌种固体培养基的制备  23
    1.3 培养条件  23
    1.4 孢子含量和产孢量测定  23
    1.5 数据统计分析  23
  2 结果与分析  23-25
  3 结论和讨论  25-26
第四章淡紫拟青霉生产配方的优化和确定  26-37
  1 材料和方法  26-28
    1.1 菌种的制备及用量  26
    1.2 不同加水含量固体培养基的制备  26
    1.3 不同氮源固体培养基的制备  26
    1.4 不同蔗糖量固体培养基的制备  26
    1.5 正交试验培养基的制备  26-27
    1.6 验证正交试验最佳配方培养基的制备  27
    1.7 培养条件  27
    1.8 菌落扩展测定  27
    1.9 孢子含量和产孢量测定  27
    1.10 数据统计分析  27-28
  2 结果与分析  28-36
    2.1 不同加水含量对36-1菌株生长的影响  28
    2.2 添加不同氮源的对36-1菌株生长和产孢的影响  28-31
      2.2.1 添加不同氮源的对36-1菌株生长的影响  28-29
      2.2.2 添加不同氮源的对36-1菌株产孢的影响  29-31
    2.3 添加不同蔗糖量对36-1菌株生长和产孢的影响  31-32
      2.3.1 添加不同蔗糖量对36-1菌株生长影响  31
      2.3.2 添加不同蔗糖量对36-1菌株产孢的影响  31-32
    2.3 正交试验结果  32-35
      2.3.1 不同试验号对淡紫拟青霉36-1生长的影响  32-33
      2.3.2 不同试验号对淡紫拟青霉36-1产孢量的影响  33-34
      2.3.3 不同因子对淡紫拟青霉36-1产孢量的影响  34-35
    2.4 正交试验最佳配方验证结果  35-36
  3 结论和讨论  36-37
第五章淡紫拟青霉固体发酵工艺研究  37-43
  1 材料及方法  37-38
    1.1 供试菌株和固体发酵菌种  37
    1.2 不同接种量固体发酵培养基的制备  37
    1.3 不同发酵周期固体发酵培养基的制备  37
    1.4 不同接种量的设置  37
    1.5 发酵周期的设置  37
    1.6 固体发酵产物在室温条件下保存对孢子萌发影响  37
    1.7 培养条件  37
    1.8 孢子含量和产孢量测定  37
    1.9 孢子萌发率测定  37-38
    1.10 数据统计分析  38
  2 结果与分析  38-42
    2.1 不同接种量对淡紫拟青霉生长和产孢的影响  38-40
      2.1.1 不同接种量对淡紫拟青霉生长影响  38
      2.1.2 不同接种量对淡紫拟青霉产孢的影响  38-40
    2.2 发酵周期对发酵产物产孢及孢子萌发率的影响  40-41
      2.2.1 发酵周期对发酵产物产孢的影响  40-41
      2.2.2 发酵周期对发酵产物孢子萌发率的影响  41
    2.3 室温下发酵产物不同贮存时间对孢子萌发率的影响  41-42
  3 结论和讨论  42-43
第六章淡紫拟青霉对常用杀线剂和杀菌剂的耐药性  43-47
  1 材料和方法  43-44
    1.1 材料  43
      1.1.1 药剂  43
    1.2 方法  43
      1.2.1 药剂浓度  43
      1.2.2 含不同药液浓度平板培养基制备  43
      1.2.3 孢子悬浮液制备  43
      1.2.4 接菌及培养  43
    1.3 观察和记录结果  43-44
  2 结果与分析  44-46
    2.1 不同杀线虫剂对淡紫拟青霉36-1菌株生长的影响  44-45
    2.2 不同杀菌剂对淡紫拟青霉36-1菌株生长的影响  45-46
  3 结论和讨论  46-47
研究前景与展望  47-48
参考文献  48-55
致谢  55

淡紫拟青霉固体发酵技术研究

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