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苦荞麦叶黄酮提纯及其功能活性研究

作　者: 贾雪峰
导　师: 钟耕
学　校: 西南大学
专　业: 农产品贮藏与加工工程
关键词: 苦荞麦叶 黄酮 芦丁 提取纯化 功能性
分类号: TQ461
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 454次
引　用: 3次
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内容摘要


为了综合利用苦荞麦资源，本研究对处于盛花期（播种后第58天）苦荞麦叶干燥粉碎物中的黄酮进行了定性定量分析，并利用苦荞麦叶为原料生产苦荞黄酮精粉（tartary buckwheat flavonoids powder，TBFP），对提取、纯化工艺进行了优化，测定了TBFP的总黄酮含量、芦丁含量，研究了TBFP功能性，并采用结晶法制备了纯化芦丁，完善了一个快速准确地测定苦荞麦中芦丁含量的高效液相色谱法。实验结论如下：（1）超声波乙醇回流浸提工艺是苦荞麦叶黄酮提取的理想工艺，最佳条件为：超声波（20kHz）处理40min，料液比1:30、pH=8的60％乙醇溶液70℃浸提120min，浸提率达95.26％。（2）本试验中苦荞麦叶黄酮的纯化工艺采用了DA—201小型大孔吸附树脂柱，最佳工艺是：将浸提液真空（60℃，0.09MPa）浓缩；200mL丙酮（AR级）萃取浓缩液，除去杂质；上样液中黄酮浓度为0.5mg／mL以1mL／min通过DA—201树脂柱（f20mm×300mm）；150 mL80％的乙醇（AR级）以1 mL／min洗脱并收集洗脱液；真空（60℃，0.09MPa）浓缩，制得苦荞麦叶黄酮精粉（TBFP）。（3）用苦荞麦叶黄酮精粉（TBFP）进一步结晶精制芦丁工艺：用甲醇加热回流溶解TBFP，过滤，滤液放冷，结晶，过滤得湿粗芦丁。母液回收甲醇，放冷结晶，过滤得湿芦丁，将2次得到的湿芦丁于烘箱中40℃，0.09MPa避光条件烘去大部分甲醇，然后逐渐升温至90℃烘干，然后利用正丁醇加热至80℃左右溶解前步制得的芦丁，过滤，滤液加5mL去离子水，放冷结晶，过滤得湿芦丁，置于0.09MPa避光条件烘箱中90℃烘干得纯芦丁。本工艺制得的纯化芦丁含量和总黄酮含量分别为95.13％、97.89％。（4）HPLC测定苦荞麦中芦丁含量的色谱条件是：色谱柱：Agilent C18，10μm，4.6×250nm不锈钢柱；流动相：甲醇—水—冰乙酸（40:60:1）；流速：1.0mL／min；检测波长：330 nm，柱温：室温（20℃）。芦丁峰形对称，与相邻杂质峰之间能达到基线分离，灵敏度和精密度高，方法简便，芦丁浓度与峰面积显著相关，回归方程为：y=806.16x+297.45，R2=0.999。（5）苦荞麦叶提取物（TBFP）具有清除O2、清除羟自由基以及还原的能力，且随着黄酮含量的增加而增加，但其清除能力及还原能力要比抗坏血酸的能力弱一些；苦荞麦叶提取物对亚硝酸钠有消除作用，对亚硝酸钠的最大清除率为67.18％。结果表明，此提取物具有较好的阻断清除亚硝酸钠的效果。

全文目录


目录  5-8
摘要  8-10
ABSTRACT  10-12
一 文献综述  12-22
  1.1 苦荞麦的营养价值  12-13
  1.2 苦荞麦的医用价值  13-14
  1.3 苦荞麦中黄酮的功能性研究状况  14-16
    1.3.1 黄酮的功能性研究  14-15
    1.3.2 黄酮药理作用  15
    1.3.3 苦荞麦的加工的应用  15-16
  1.4 苦荞麦黄酮的提取工艺研究  16-18
    1.4.1 醇提法  16
    1.4.2 碱性水或碱性稀醇提取法  16
    1.4.3 有机溶剂萃取法  16
    1.4.4 酶法  16-17
    1.4.5 超临界流体萃取法  17
    1.4.6 超声波提取法  17
    1.4.7 微波处理法  17
    1.4.8 表面活性剂协同提取法  17-18
  1.5 苦荞麦黄酮的纯化工艺研究  18-19
    1.5.1 膜分离法  18
    1.5.2 大孔树脂法  18
    1.5.3 柱色谱法  18-19
  1.6 苦荞麦黄酮的检测  19-20
    1.6.1 紫外分光光度法  19
    1.6.2 卡尔曼滤波光度法  19
    1.6.3 薄层扫描法  19-20
    1.6.4 单扫示波极谱法  20
    1.6.5 高效液相色谱法  20
  1.7 研究的目的和意义  20-22
二 实验的材料与设备及操作步骤  22-33
  前言  22
  2.1 材料与设备  22-24
    2.1.1 原料  22-23
    2.1.2 试剂  23
    2.1.3 仪器  23-24
  2.2 试验方法  24-32
    2.2.1 苦荞黄酮的初步定性分析—颜色反应鉴别试验  24
    2.2.2 苦荞麦叶黄酮紫外吸收曲线的制作  24
    2.2.3 芦丁的标准曲线绘制  24-25
    2.2.4 苦荞麦叶黄酮浸提率的测定  25
    2.2.5 苦荞麦叶提取物中总黄酮含量的测定  25
    2.2.6 苦荞麦叶预处理  25-26
    2.2.7 苦荞麦叶黄酮提取工艺研究  26-27
    2.2.8 萃取除脂  27
    2.2.9 苦荞麦叶黄酮的大孔吸附树脂纯化的研究  27-29
    2.2.10 苦荞麦叶黄酮纯化物的干燥和精制  29-30
    2.2.11 芦丁含量 HPLC法测定  30
    2.2.12 苦荞黄酮精粉(TBFP)功能性的试验  30-32
  2.3 数据分析方法  32-33
三 试验结果与分析  33-50
  3.1 苦荞麦叶黄酮定性定量分析颜色反应鉴定  33
  3.2 苦荞麦叶超声波乙醇回流浸提液的紫外吸收曲线  33
  3.3 苦荞麦植株各部位中总黄酮含量的测定  33-34
  3.4 苦荞麦黄酮提取工艺研究  34-38
    3.4.1 超声波乙醇回流浸提法  34-38
  3.5 苦荞麦叶黄酮的大孔吸附树脂纯化的研究  38-45
    3.5.1 树脂的选择  38
    3.5.2 上样液中黄酮浓度对吸附率的影响  38-39
    3.5.3 上样液的pH值对吸附率的影响  39
    3.5.4 树脂的静态吸附曲线  39-40
    3.5.5 上样液流过树脂柱的流速对黄酮的吸附率的影响  40
    3.5.6 DA-201树脂柱吸附黄酮的动态吸附曲线  40-41
    3.5.7 洗脱剂的选择  41
    3.5.8 乙醇浓度对黄酮的洗脱率的影响  41-42
    3.5.9 乙醇洗脱流速对黄酮洗脱率的影响  42
    3.5.10 乙醇洗脱黄酮的动态解吸曲线  42-45
  3.6 芦丁结晶纯化、精制  45
  3.7 芦丁含量 HPLC测定  45-47
    3.7.1 HPLC灵敏度试验  46-47
    3.7.2 结晶纯化精制苦荞麦叶黄酮的纯度检测  47
  3.8 苦荞麦叶黄酮(TBFP)的功能性试验  47-50
    3.8.1 超氧化阴离子清除试验  47-48
    3.8.2 游离羟基清除试验  48
    3.8.3 还原力的测定  48-49
    3.8.4 苦荞麦叶黄酮(TBFP)抑制亚硝酸盐试验  49-50
四 实验结论  50-52
参考文献  52-56
致谢  56-58
发表文章  58

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中图分类: > 工业技术 > 化学工业 > 制药化学工业 > 中草药制剂的生产
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