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斑点叉尾鮰急性败血症病原学、病理形态学及其全菌灭活苗免疫效果研究

作　者: 倪俊
导　师: 汪开毓
学　校: 四川农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 斑点叉尾鮰败血症维氏气单胞菌分离鉴定病理形态学灭活全菌苗
分类号: S943
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

2007年在四川绵阳、眉山、德阳等地发生了一种严重危害斑点叉尾鮰健康养殖的急性败血症,该病具有发病突然,死亡率高,传染快等特点,以体表出现不规则褪色斑,腹部肿胀,血样腹水和内脏器官充、出血为病变特征。由于病原不详,养殖户盲目用药,病情难以控制,造成惨重的经济损失,对斑点叉尾鮰养殖业发展造成消极影响,严重挫伤了广大养殖户的养殖积极性。因此,为确保斑点叉尾鮰养殖业健康稳定的发展,开展斑点叉尾鮰该病的病原学、病理学和防治等的研究工作意义非常重要。本实验从四川德阳中江继光水库发生急性败血症状的斑点叉尾徊(Ictalurus punctatus)体内分离出一株病原菌,命名为D070801,该菌为革兰氏染色阴性,兼性厌氧发酵型短杆菌,对除葡萄糖、麦芽糖、甘露糖、蔗糖、果糖、七叶苷以外多种糖不利用,氧化酶、DNA酶、淀粉酶、鸟氨酸脱羧酶、赖氨酸脱羧酶阳性、精氨酸双水解酶、甲基红、吲哚、VP阳性。在以该菌16S rDNA序列和GenBank及RDP数据库内同源性较高的细菌16S rDNA序列构建的系统发育树中,与维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)同源性达到99.1%,综合该菌形态及生理生化特性,鉴定其为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)。该病原对氟哌酸、强力霉素、氟苯尼考、链霉素、丁胺卡那霉素、新霉素高度敏感。采用7.5×106CFU／ml维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)菌液对斑点叉尾鮰进行腹腔注射的人工感染试验,结果表明,维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)感染斑点叉尾鮰主要病变为体表出现褪色斑,鳃丝肿胀、充血,上下颌出血,腹部膨大,腹腔内有带血腹水,肛门红肿,肝、脾、肾等内脏器官肿大、充出血,脑、脂肪充血,肠腔内充满含血粘液,部分病鱼出现后肠充气肿胀、肠套叠的特点。病理组织学上,鳃小片水肿,上皮细胞的增生和肿胀,呼吸上皮肿胀与毛细血管分离,大量炎症细胞浸润。心肌纤维变性水肿,间隙内炎症细胞浸润。肝细胞空泡变性,甚至出现坏死,肝脏原有的索状结构消失。脾出血,脾内充满大量红细胞,脾淋巴细胞坏死。肾小囊内多量炎性渗出物,肾小管上皮细胞空泡变性、坏死,结构破坏。胃充血明显,胃壁毛细血管扩张、淤血,胃粘膜分泌多量炎性渗出物,胃腺腺上皮细胞肿胀。肠黏膜上皮坏死、脱落,黏膜下层水肿。脑软膜血管扩张,脑膜充血,脑实质神经原细胞内血管周间隙增宽。利用维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)的灭活全菌苗(菌苗浓度为108CFU/ml)对斑点叉尾鮰进行浸泡免疫,分别在首次免疫后7d、21d、35d进行受免鱼的免疫效果测定,结果表明其血清凝集抗体效价、血清白蛋白、总蛋白、溶菌酶含量均显著增高。以3.3×108CFU/ml浓度维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)菌液对首次免疫后7d和加强免疫后7d的斑点叉尾鮰分别进行活菌攻毒,结果表明受免鱼的相对免疫保护率(RPS)分别达到32.6%和48.8%。

全文目录

摘要  7-9
Abstract  9-11
1. 文献综述  11-23
  1.1 斑点叉尾鮰生物学特性  11-13
    1.1.1 形态特征  12
    1.1.2 分布  12
    1.1.3 生活习性  12-13
    1.1.4 生长繁育  13
    1.1.5 斑点叉尾鮰的养殖现状  13
  1.2 斑点叉尾鮰几种常见细菌性病原  13-17
    1.2.1 嗜水气单胞菌  14-15
    1.2.2 徊爱德华氏菌  15
    1.2.3 柱状屈挠杆菌  15-17
    1.2.4 其他细菌性病原  17
  1.3 维氏气单胞菌研究进展  17-18
  1.4 鱼用疫苗研究进展  18-20
  1.5 斑点叉尾鮰细菌性疾病的防治  20-23
    1.5.1 环境因子的改良  20-21
      1.5.1.1 养殖水体的优化  20-21
      1.5.1.2 日常管理的规范  21
      1.5.1.3 养殖密度的适宜  21
    1.5.2 渔药的科学使用  21-22
    1.5.3 疫苗的使用  22-23
2. 研究的目的意义  23-24
3. 实验材料与方法  24-34
  3.1 实验材料  24-26
    3.1.1 试验鱼  24
    3.1.2 主要培养基  24-25
    3.1.3 主要试剂  25
    3.1.4 主要仪器  25-26
  3.2 方法  26-34
    3.2.1 病原学研究  26-27
      3.2.1.1 病毒性病原检查  26
      3.2.1.2 寄生虫性病原检查  26
      3.2.1.3 细菌性病原检查  26-27
    3.2.2 病原菌表型特征测定  27-29
      3.2.2.1 培养特性观察  27
      3.2.2.2 形态学特性观察  27
      3.2.2.3 病原菌生理、生化特性  27-28
      3.2.2.4 16S rDNA分析  28-29
    3.2.3 防治药物的筛选  29
      3.2.3.1 菌液制备  29
      3.2.3.2 药物敏感试验  29
    3.2.4 病理学研究  29-31
      3.2.4.1 菌株的培养与感染  29-30
      3.2.4.2 症状与病理剖解观察  30
      3.2.4.3 组织学病理学观察  30-31
    3.2.5 全菌苗对斑点叉尾鮰免疫效果初探  31-34
      3.2.5.1 菌苗制备方法  31
      3.2.5.2 菌苗安全性试验  31
      3.2.5.3 田间免疫试验  31-32
      3.2.5.4 免疫效果监测  32-34
4. 结果  34-44
  4.1 病毒、寄生虫的检查  34
  4.2 细菌性病原检查  34-35
  4.3 病原菌鉴定  35-39
    4.3.1 培养特性与形态学特性  35-36
    4.3.2 生理生化特征  36-37
    4.3.3 16S rDNA分析  37-39
  4.4 防治药物筛选  39-40
    4.4.1 药敏试验  39-40
  4.5 病理学研究  40-41
    4.5.1 临床症状与病理剖解  40
    4.5.2 组织病理学观察  40-41
  4.6 维氏气单胞菌灭活苗免疫保护效果  41-44
    4.6.1 制备条件的筛选  41
    4.6.2 菌苗安全性试验  41-42
    4.6.3 田间免疫试验  42
    4.6.4 血清指标  42
    4.6.5 抗体凝集效价  42-43
    4.6.6 相对免疫保护率  43-44
5. 讨论  44-49
  5.1 病原学研究  44-45
    5.1.1 病毒、寄生虫检查  44
    5.1.2 细菌性病原检查  44-45
  5.2 病理形态学研究  45-47
    5.2.1 临床症状  45-46
    5.2.2 组织病理学  46-47
  5.3 灭活全菌苗浸泡免疫效果  47-48
  5.4 综合防治措施  48-49
6. 结论  49-50
7. 参考文献  50-57
致谢  57-58
图版  58-63

斑点叉尾鮰急性败血症病原学、病理形态学及其全菌灭活苗免疫效果研究

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