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毛细管电泳法测定核苷在癌症诊断中的研究

作　者: 王宏光
导　师: 陈亮
学　校: 厦门大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 毛细管电泳原发性肝癌修饰核苷
分类号: R730.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

本实验采用毛细管电泳法测定尿中核苷的含量,拟探讨尿中核苷在原发性肝癌诊断中的意义。首先考察了运行缓冲液的pH值、SDS浓度、分离电压、柱温及进样量对分离效果的影响,建立了胶束电动力学毛细管色谱法分离10种核苷最佳方法。核苷标样在优化的250 mmol/L十二烷基磺酸钠(SDS)、20 mmol/L四硼酸钠及40 m mol/L二水合磷酸二氢钠组成的缓冲液(pH 6.8)条件下,在未涂层石英毛细管上, 10 kV恒压,2 psi×s进样量, 25℃, 260 nM检测波长下通过胶束电动力学毛细管色谱法(MECC)进行分离。用此方法,尿嘧啶核苷(U)、胞嘧啶核苷(C)、5-甲基尿苷(m5U)、4-乙酰胞苷(ac4C)、次黄嘌呤核苷(I)、鸟嘌呤核苷(G)、腺嘌呤核苷(A)、3-脱丫尿苷(3-Dzu)、黄嘌呤核苷(X)、N2,2-甲基鸟苷(m22G)、1-甲基腺嘌呤苷(m1A)等10种核苷在25 min内达到基线分离。随机尿样中核苷值变化很大,但尿中核苷与肌酐的比值却相当恒定,所以我们应用核苷与肌酐的比值来反映尿中核苷的含量。因此在优化的条件下采用CZE的模式对尿中肌酐进行测定。通过上述方法,检测了20位健康人及20位原发性肝癌患者尿中核苷的含量。健康人尿中10核苷的平均值为:U (0.24+0.07)、C (0.12+0.03)、m5U(0.11+0.04)、ac4C (0.32+0.14)、I (0.18+0.06)、G(0.13+0.03)、A(0.20+0.04)、X(0.36+0.14)、m22G(0.40+0.17)、m1A(1.49+0.38)。原发性肝癌患者尿中10种核苷的平均值为:U(0.40+0.15 )、C(0.14+0.05)、m5U(0.21+0.14)、ac4C (0.92+0.32)、I (0.38+0.19)、G(0.24+0.11)、A(0.29+0.13)、X(0.60+0.41)、m22G(0.91+0.38)、m1A (2.23+1.22)。统计结果显示,原发性肝癌患者尿中核苷特别是修饰核苷的排放水平高于健康人。在10种核苷中, ac4C、I、m22G、m1A、m5U增高尤其显著。为了探讨尿中核苷的排放量与肿瘤细胞生长的关系,对经过癌变处理的大鼠尿中核苷进行测定,结果显示,癌变大鼠尿中核苷的排放量与肿瘤细胞的生长呈正相关性。这提示我们尿中核苷的排放水平在一定程度上反映了肿瘤细胞的增殖

毛细管电泳法测定核苷在癌症诊断中的研究

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