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裂褶菌活性多糖发酵及酶解技术研究

作　者: 黄荔
导　师: 余龙江；周蓬蓬
学　校: 华中科技大学
专　业: 生物化工
关键词: 裂褶菌胞外多糖发酵技术酶促降解活性多糖
分类号: TQ920.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

裂褶菌胞外多糖(Schizophyllan, SPG)是一种大分子量的真菌多糖,其特殊的β-(1,3)主链和β-(1,6)支链结构,让其具有高度的免疫活性和抗肿瘤活性。SPG可从裂褶菌水提得到,亦可由纯培养的裂褶菌发酵得到。通过不同菌种的裂褶菌培养得到的胞外多糖分子量不同。其中,重均分子量Mw=4.5×105 Da的SPG已经开发作为临床抗肿瘤佐剂。本文通过对本实验室保藏的裂褶菌(Schizophyllum commune IRB0917)进行胞外多糖(SPG)合成的培养条件及培养基优化,以及发酵物预处理技术和特定分子量多糖酶促降解技术的探索,取得了以下主要成果:(1)建立了高产SPG发酵物预处理技术及工艺:菌体沸水浴抽提两次,每次2 h,合并抽提液和发酵原液后,获得的多糖产量与不进行处理的相比,可提高55%;采用透析袋处理发酵液,再醇析得到粗多糖,可得到脱色效果理想的粗多糖,且粗多糖保留率92.85%;(2)建立了裂褶菌多糖含量测定的刚果红染色法,经测定,本实验室得到的粗多糖含量为86.28%;(3)优化了裂褶菌胞外多糖的培养条件:温度28-30℃,初始pH5.6,摇瓶装液量100 ml/250 ml三角瓶,培养周期168 h,转速180 rpm,此条件下获得胞外多糖产量为10.80g/L;(4)通过响应面优化确定了提高SPG生长因子的最佳添加量,并优化了发酵培养基:葡萄糖12%、酵母粉1%、蛋白胨0.2%、K2HPO4 0.2%、MgSO4·7H2O 0.1%,CMC-Na 0.92%,柠檬酸0.209%,叶酸1.45 mg/L,NAA 0.4 mg/L,此条件下获得胞外多糖产量为13.37 g/L;(5)进行了10 L发酵罐放大发酵实验研究,优化了发酵条件:在0.5 m3/h通气量、200 rpm转速条件下发酵120 h,裂褶菌胞外多糖产量为22.09 g/L;(6)建立了裂褶菌胞外多糖酶促制备活性多糖的技术及工艺:将脱色脱盐后的发酵液稀释5倍,再按1μl酶液/ 1 ml发酵液的量,加入β-葡聚糖酶,在28℃酶促降解5 min,经检测,得到平均分子量为4.47×105 Da的活性多糖,且含量为63.20%。

全文目录

摘要  4-6
Abstract  6-10
1 绪论  10-20
  1.1 裂褶菌及裂褶菌多糖简介  10-12
  1.2 多糖及裂褶菌多糖的生物活性  12-13
  1.3 裂褶菌多糖的应用进展  13-16
  1.4 裂褶菌多糖的发酵生产技术研究进展  16-19
  1.5 本研究目的及主要内容  19-20
2 裂褶菌胞外多糖制备技术优化及其测定方法的建立  20-29
  2.1 材料  20
  2.2 方法  20-22
  2.3 结果及讨论  22-28
  2.4 本章小结  28-29
3 裂褶菌多糖高产发酵技术研究  29-52
  3.1 材料  29
  3.2 方法  29-34
  3.3 实验结果和讨论  34-50
  3.4 本章小结  50-52
4 裂褶菌胞外多糖发酵技术放大研究  52-56
  4.1 材料  52
  4.2 方法  52-53
  4.3 结果和讨论  53-54
  4.4 本章小结  54-56
5 特定分子量裂褶菌活性多糖酶解制备技术  56-60
  5.1 材料  56
  5.2 方法  56-57
  5.3 结果和讨论  57-59
  5.4 本章小结  59-60
6 总结和展望  60-62
  6.1 总结  60-61
  6.2 展望  61-62
致谢  62-63
参考文献  63-69
附录1(酶促降解制备分子量为4.47×105 Da SPG GPC 图谱)  69

裂褶菌活性多糖发酵及酶解技术研究

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