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微小牛蜱Bm86基因的克隆及原核表达

作　者: 樊瑞泉
导　师: 杨孝朴；殷宏；罗建勋
学　校: 甘肃农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 微小牛蜱 Bm86基因 克隆 表达
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
下　载: 34次
引　用: 0次
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内容摘要


根据已发表的Bm86基因序列,设计表达引物,利用RT-PCR技术,从微小牛蜱饥饿幼蜱的研磨物中扩增Bm86基因,将PCR产物连入pGEM-T Easy载体,构建重组克隆载体pGEM-T easy-Bm86。测序分析表明:克隆的微小牛蜱Bm86基因序列与GenBank上登录的Bm86基因的核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为97%和95.6%。然后对重组克隆载体pGEM-T easy-Bm86进行双酶切,获得带有粘性末端的Bm86基因片段,并将此片段定向亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,构建重组原核表达载体pGEX-4T-1-Bm86,将其转化到BL21宿主菌中,用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE检测表明表达产物为分子量为88Ku的融合蛋白,目的蛋白约占蛋白总量的39%,表达量约为1.08mg/mL。Western blot分析表明此表达产物能被兔抗微小牛蜱阳性血清所识别。

全文目录


摘要  2-3
Summary  3-6
文献综述：蜱类功能分子及防治研究进展  6-21
  1. 蜱的地理分布  6-7
  2. 蜱的功能分子研究现状  7-10
  3. 蜱功能分子研究的应用前景  10-11
  4. 蜱的免疫学防治  11-14
  5. 蜱诱导的宿主免疫反应  14-18
  6. 抗蜱疫苗的研究与应用  18-21
研究报告：微小牛蜱Bm86 基因的克隆及原核表达  21-41
  前言  21-23
  1. 材料  23-25
  2. 方法  25-36
    2.1 免疫血清的制备  25
    2.2 微小牛蜱总RNA 的提取  25
    2.3 微小牛蜱m RNA 的纯化  25
    2.4 微小牛蜱cDNA 的合成  25
    2.5 目的基因Bm86 的扩增  25-26
    2.6 目的基因的克隆  26-27
    2.7 重组克隆质粒的提取与鉴定  27-29
    2.8 重组表达载体的构建  29-30
    2.9 重组质粒的表达  30-36
  3. 结果  36-39
  4. 讨论  39-41
参考文献  41-51
致谢  51-52
个人简介  52-53
导师简介  53-54

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中图分类: > 生物科学 > 分子生物学 > 基因工程（遗传工程）
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