学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

鸭和鹅A型禽流感间接ELISA抗体检测方法的建立

作　者: 孙凌霜
导　师: 王君伟
学　校: 东北农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 水禽 水禽流感 A型流感检测 卵黄免疫球蛋白 HRP标记IgG 间接ELISA
分类号: S854.43
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
下　载: 196次
引　用: 2次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


鸭、鹅等水禽不仅是AIV的巨大储存库和传染源在禽流感的传播中发挥重要作用，而且可自然感染HPAIV发病并且死亡。我国是世界养禽大国，也是世界主要鸭、鹅养殖地，禽流感的检测，尤其是水禽流感的检测，不仅直接关系到我国鸭、鹅养殖业能否健康、快速发展，而且关系到世界范围内禽流感的防控和人类公共卫生安全。 本试验以改良氯仿抽提法提纯鸭、鹅卵黄免疫球蛋白，制备并纯化兔抗鸭、兔抗鹅抗体为基础，通过质量鉴定，选择最优HRP标记IgG的制备和纯化方法，再以此HRP标记兔抗鸭和兔抗鹅IgG及纯化原核表达的AIV的M1、NP为基础，通过各种条件的摸索，分别建立了鸭和鹅A型禽流感抗体检测的M1-ELISA和NP-ELISA，并对此ELISA体系进行评价。 试验表明：改良氯仿抽提法适于鸭和鹅卵黄免疫球蛋白的提纯，提纯的IgY和IgY(△Fc)纯度均＞90％、活性均＞1：64；制备并纯化的兔抗鸭和兔抗鹅IgG的效价均＞1：16、纯度均＞90％、亲和力均＞10~9，基本满足制备酶结合物的标准；调节PH法优于乙二醇封闭法，可较好的防止HRP过分醛化和自身交联；HRP标记IgG的最佳纯化法为G200与50％硫酸铵盐析相结合的方法。本试验以制备的HRP标记兔抗鸭和兔抗鹅IgG的摩尔比均在1.5～2.0之间，结合物产率均＞40％，酶活性均＞1000U，使用浓度均＞1：1000。 本试验建立了NP-ELSIA和M1-ELISA鸭A型AI抗体检测方法，对鸭肝炎、鸭瘟血清的检测均为阴性，且可分别被NP和M1阻抑；对H5和H7亚型AI抗体检测的敏感性分别为1：6400和1：6400、1：3200和1：1600，对H9亚型AI抗体的检出为阴性和弱阳性／阴性；板间和板内变异系数分别为3.0％和9.1％、4.5％和7.9％。表明NP-ELSIA和M1-ELISA对H5和H7鸭A型AI抗体检测具有高特异性、敏感性和重复性，NP-ELSIA优于M1-ELISA。本试验建立了NP-ELSIA和M1-ELISA鹅A型AI抗体检测方法，对鹅副黏病毒病、小鹅瘟血清的检测均为阴性，且可分别被NP和M1阻抑；对H5、H7和H9亚型AI抗体检测的敏感性分别为1：3200和1：800、1：12800和1：3200、1：800和1：200；板间和板内变异系数分别为4.8％和7.3％、3.9％和6.7％。表明NP-ELSIA和M1-ELISA对H5和H7鹅A型AI抗体检测具有高特异性、敏感性和重复性，NP-ELSIA优于M1-ELISA。 M1-ELISA和NP-ELISA鸭、鹅A型AI抗体检测技术可用于我国鸭、鹅养殖业禽流感的检测、疫苗免疫效果的监测及免疫程序的制定，对于我国鸭、鹅养殖业的健康快速发展起到直接的推动作用。此法还可用于鸭、鹅禽流感的血清学监测，对于我们了解水禽的禽流感史、AIV的生态学分布及世界范围内禽流感的监控、预警、预报都有着重要的意义。另外，此法还为区分鸭、鹅A型AI的自然感染和人工免疫提供了技术储备。

全文目录


中文摘要  8-9
英文摘要  9-11
1 前言  11-21
  1.1 禽流感  11-14
    1.1.1 禽流感及其危害  11-12
    1.1.2 水禽流感  12-13
    1.1.3 AIV及其抗原蛋白  13-14
  1.2 水禽流感抗体检测  14-17
    1.2.1 鸭、鹅免疫球蛋白  14-16
    1.2.2 鸭、鹅抗体与AIV感染  16
    1.2.3 水禽抗体检测方法研究进展  16-17
  1.3 抗体的酶标记  17-20
    1.3.1 辣根过氧化物酶(HRP)  18
    1.3.2 过碘酸钠法酶结合物制备原理  18-19
    1.3.3 酶抗体结合物的纯化  19
    1.3.4 酶标抗体结合物的质量鉴定  19-20
  1.4 以NP、M1为抗原的间接 ELISA鸭、鹅A型流感检测的特点  20
  1.5 试验目的和意义  20-21
2 材料与方法  21-28
  2.1 试验材料  21-22
    2.1.1 试验动物  21
    2.1.2 检测用抗原  21
    2.1.3 主要试剂  21
    2.1.4 主要溶剂及其配制方法  21
    2.1.5 仪器和设备  21-22
  2.2 试验方法  22-28
    2.2.1 鸭、鹅卵黄免疫球蛋白的提纯、鉴定及分析  22
    2.2.2 兔抗鸭、鹅抗血清的制备、纯化及质量鉴定  22-23
    2.2.3 HRP标记兔抗鸭、鹅 IgY+IgY(△Fc)(H+L)抗体的制备  23
    2.2.4 鸭、鹅抗 AIV血清的制备  23
    2.2.5 以M1为抗原鸭A型AI间接ELISA检测方法的建立  23-25
    2.2.6 以NP为抗原鸭 A型AI间接 ELISA检测方法的建立  25-26
    2.2.7 鸭 M1-ELISA与NP-ELISA对鸭A型AI检测的比较  26
    2.2.8 以M1为抗原鹅 A型AI间接 ELISA检测方法的建立  26
    2.2.9 以NP为抗原鹅 A型AI间接 ELISA检测方法的建立  26-27
    2.2.10 鹅 M1-ELISA与NP-ELISA对鹅A型AI检测的比较  27-28
3 结果与分析  28-52
  3.1 HRP标记兔抗鸭、兔抗鹅抗体的制备  28-34
    3.1.1 鸭、鹅卵黄免疫球蛋白的提纯、鉴定及分析  28-31
    3.1.2 兔抗鸭、鹅抗血清的制备、纯化及质量鉴定  31-32
    3.1.3 辣根过氧化物酶标记兔抗鸭、鹅抗体的制备  32-34
  3.2 鸭A型AI间接 ELISA检测方法的建立  34-44
    3.2.1 以M1为抗原鸭A型AI间接ELISA检测方法的建立  34-40
    3.2.2 以NP为抗原鸭A型AI间接ELISA检测方法的建立  40-44
    3.2.3 M1-ELISA和NP-ELISA鸭A型AI检测方法的比较  44
  3.3 鹅A型AI间接 ELISA检测方法的建立  44-52
    3.3.1 以M1为抗原鹅A型AI间接ELISA检测方法的建立  44-47
    3.3.2 以NP为抗原鹅A型AI间接ELISA检测方法的建立  47-51
    3.3.3 M1-ELISA和NP-ELISA鹅A型AI检测方法的比较  51-52
4 讨论  52-58
  4.1 HRP兔抗鸭及HRP兔抗鹅抗体的制备  52-54
    4.1.1 鸭、鹅卵黄免疫球蛋白的提纯、鉴定及分析  52-53
    4.1.2 兔抗鸭、鹅抗体的制备、纯化及鉴定  53
    4.1.3 酶标记抗体的制备、纯化及其鉴定  53-54
  4.2 鸭、鹅A型AI间接 ELISA检测方法  54-58
    4.2.1 鸭、鹅A型流感间接 ELISA检测方法的建立  55-56
    4.2.2 M1-ELISA和NP-ELISA对A型AI检测方法的比较  56-58
5 结论  58-59
致谢  59-60
参考文献  60-64
攻读硕士期间发表的学术论文  64

相似论文

  1. 企鹅珍珠贝Cd-MT酶联免疫检测方法的建立及试剂盒的初步研制,X835
  2. 鸭源鸡杆菌抗体消长规律研究及抗脂多糖单抗杂交瘤细胞株的建立,S858.32
  3. 稳定分泌抗羊种布鲁菌脂多糖单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立,R392
  4. IBDV模拟表位与vp2组合基因的分子构建及其在昆虫细胞中的表达与应用,S852.65
  5. 犬细小病毒2型VP2基因在昆虫细胞中的表达及血清抗体间接ELISA检测方法的建立,S852.65
  6. 华东地区鸭圆环病毒感染流行病学调查及其单克隆抗体的制备,S858.32
  7. 猪流感病毒NS1蛋白间接ELISA检测方法的建立及NS、NP蛋白细胞定位研究,S858.28
  8. J亚型禽白血病病毒抗体检测方法的建立及LTR体外启动活性分析,S858.31
  9. 兔源支气管败血波氏杆菌PRN蛋白的表达及其免疫保护性研究,S855.12
  10. 鸡志贺氏菌病平板凝集试验和间接ELISA诊断方法的建立及应用,S858.31
  11. 肺炎支原体ORF6区基因的克隆与表达及应用于血清学诊断的初步研究,R440
  12. 冷藏牙鲆中主要腐败菌卵黄抗体的制备及其抑菌性能研究,TS254.1
  13. 日本乙型脑炎病毒E蛋白单克隆抗体的筛选及其抗原表位的初步鉴定研究,R512.32
  14. 抗牙龈卟啉单胞菌IgY的制备和体外研究,R392.1
  15. 水禽空肠弯曲菌流行病学及分离株的多位点序列分型分析,S855
  16. 牛新孢子虫抗原分析及间接ELISA检测方法的建立,S858.23
  17. 猪巨细胞病毒囊膜糖蛋白B重组抗原的研制及应用,S852.4
  18. 猪细小病毒变异株ELISA检测方法的建立及血清流行病学初步调查,S858.28
  19. 猪繁殖与呼吸综合征病毒及其N蛋白卵黄抗体的制备与鉴定,S852.5
  20. 传染性法氏囊病病毒VP2基因的分子特征、表达与应用,S852.65
  21. 猪圆环病毒2型cap蛋白在昆虫细胞中的表达及间接ELISA抗体诊断方法的建立,S852.65

中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医临床医学 > 兽医诊断学 > 实验室诊断法
© 2012 www.xueweilunwen.com