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应用基于上转换发光技术的免疫层析法检测鼠疫耶尔森氏菌

作　者: 闫中强
导　师: 杨瑞馥
学　校: 中国人民解放军军事医学科学院
专　业: 军事预防医学
关键词: 上转换发光技术 免疫层析分析方法 夹心法免疫反应 鼠疫耶尔森氏菌 F1抗原
分类号: R378
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要


目的：利用基于上转换发光技术(Up-Converting Phosphor Technology，UPT)生物传感器与免疫层析分析方法(immunochromatographic assay，ICA)相结合的技术平台，研制开发基于上转换发光材料(Up-Converting Phosphor，UCP)为标记物的免疫层析试纸条，实现对鼠疫耶尔森氏菌高灵敏度快速地现场检测，同时为UPT-ICA在多种生物分析中的广泛应用奠定基础。 方法：采用400-nm大小的UCP颗粒作为标记物，双抗体夹心法作为反应模式来制备免疫层析试纸条；通过UPT生物传感器对免疫层析试纸条上经免疫反应而结合的UCP发光信号进行扫描检测，在一定范围内搜索检测带信号(V_T)和质控带信号(V_C)，并计算得出检测带与质控带的信号比值(V_T／V_C)，利用此信号比值可以对标本中的鼠疫耶尔森氏菌F1抗原、全菌进行定性和定量检测。 结果：检测鼠疫耶尔森氏菌的UPT-ICA试纸条具有较高的特异性，检测灵敏度为10，000CFU／ml，并在10~4～10~8CFU／ml浓度范围内具有良好的线性响应特性，且与平板活菌计数法有较好的一致性(r=0.92406，p＜0.001)，批内和批间误差(CV)＜15％。检测F1抗原的灵敏度为1ng／ml，其线性检测范围为1-300ng／ml。 结论：UPT-ICA系统能快速特异地定性、定量检测鼠疫耶尔森氏菌F1抗原和全菌，在鼠疫的现场监测过程中具有广阔的应用前景。

全文目录


中文摘要  7-8
英文摘要  8-10
前言  10-17
  1.鼠疫流行概况及监测  10-11
  2.鼠疫病原体的研究概况  11-12
  3.上转换发光技术(UPT)及其应用  12-14
  4.免疫层析分析方法(ICA)及其应用  14-16
  5.本研究的立题依据和目的意义  16-17
一 UPT-ICA技术平台简介  17-33
  1 UCP颗粒的制备、表面修饰与活化  17-19
    1.1 UCP颗粒的制备  17-18
    1.2 UCP颗粒的表面修饰与活化  18
    1.3 UCP—生物活性分子结合物的制备  18-19
  2 UPT-ICA检测试纸条的研制  19-26
    2.1 UPT-ICA检测试纸条的结构及材料选择  19-22
    2.2 UPT-ICA检测试纸条的反应模式和反应原理  22-23
    2.3 UPT-ICA检测试纸条的制备流程及所需设备  23-26
  3 UPT生物传感器  26-31
    3.1 UPT生物传感器检测原理  26-27
    3.2 UPT生物传感器检测结果的输出及数据处理  27-31
  4 UPT-ICA技术平台定量检测的实现  31-33
二 UPT-ICA快速定量检测鼠疫菌F1抗原  33-45
  引言  33
  1 材料与方法  33-38
    1.1 材料  33-34
    1.2 方法  34-38
  2 结果与讨论  38-45
    2.1 UPT-ICA检测系列浓度鼠疫菌F1抗原标准品的数据结果  38
    2.2 确定检测灵敏度和范围  38-39
    2.3 绘制标准浓度工作曲线  39-40
    2.4 盲测样品的检测结果  40-41
    2.5 讨论  41-45
三 UPT-ICA快速定量检测鼠疫菌EV76  45-63
  引言  45
  1 材料与方法  45-51
    1.1 材料  45-47
    1.2 方法  47-51
  2 结果与讨论  51-63
    2.1 UPT-ICA技术平台的定量检测原理  51-53
    2.2 定量UPT-ICA方法的敏感性、特异性和重复性  53-56
    2.3 定量UPT-ICA方法检测实验感染小鼠肺组织标本结果  56-57
    2.4 UPT-ICA方法检测“模拟白色粉末”结果  57-59
    2.5 UPT-ICA检测试纸条稳定性评价  59-63
四 制备检测鼠疫菌抗体的UPT-ICA试纸条  63-68
  引言  63-65
  1 试纸条材料的准备  65
  2 抗原、抗体的准备  65-66
  3 试纸条各组分材料的处理  66
  4 检测试纸条的成型保存  66-68
五 UPT-ICA技术平台的现场初步考核  68-74
  引言  68-70
  1 材料方法  70-71
    1.1 材料  70-71
    1.2 方法  71
  2 结果与讨论  71-74
    2.1 1263例鼠类血清的检测结果  71-73
    2.2 166例鼠脏器的检测结果  73
    2.3 讨论  73-74
六 结论  74-76
参考文献  76-81
综述  81-93
发表的文章  93-102
致谢  102-103

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学） > 病原细菌
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