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低橘霉素高色价红曲霉固态发酵研究
作 者: 盖栋梁
导 师: 刘爱英;梁宗琦
学 校: 贵州大学
专 业: 微生物学
关键词: 红曲 红曲霉 红曲色素 橘霉素 诱变 最优回归设计 真菌激发子
分类号: TQ925.9
类 型: 硕士论文
年 份: 2006年
下 载: 223次
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内容摘要
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本试验利用紫外线和氯化锂对Monascus purpureus GX菌株进行复合诱变,在最佳紫外线照射时间为80秒和最佳氯化锂浓度为1.0‰的情况下,获得了一株橘霉素产量低、色价中等的突变菌株M.S9。突变株M.S9发酵的红曲米色价为873U/g,Citrinin含量为18mg/kg。将该菌株连续培养五代后,其红曲米色价为892U/g,Citrinin含量为26mg/kg。可见,突变菌株M.S9的橘霉素和色素代谢是比较稳定的。 以色价为目标函数,初始pH值(x1)、初始温度(x2)、接种量(x3)、乙醇浓度(x4)、豆油浓度(x5)为试验因子,选用二次饱和D—最优设计法(R521D)设计试验方案,利用DPS和SPSS统计软件,对试验数据进行分析,得到红曲米色价与各试验因子的最优回归方程为: y=-9660.96+556.37x1+790.35x2-2172.71x4-1452.35x5-127.31x12-16.99x22-20.70x32-803.95x52+12.28x1x2+189.69x1x5+8.36x2x3+56.12x2x4+45.3x2x5+402.85x4x5 并在此基础上进行了单因素和双因素的效应分析,当红曲米色价达到理论最高值1411U/g时,各因素的最佳组合为:初始pH值为3.8、初始温度为26.8℃、接种量为13.5%、乙醇浓度0.5%、豆油浓度1%。:经过试验验证,各因子最佳组合时,红曲米色价为1423U/g。 同时,我们将分离自茶泡上的一种坏损外担子菌(Exobasidium vexans)的无性型作为一种真菌激发子对突变菌株进行相关试验表明,其无性型菌株HX的发酵粗提物对红曲霉突变株M.S9色素的代谢没有明显影响。
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全文目录
第一章 绪论 13-20 1 红曲霉在真菌界的分类地位 13-15 2 红曲的医疗保健功能 15-17 3 红曲色素的结构、功能与应用 17-18 4 红曲中橘霉素含量的标准 18 5 红曲中部分活性物质分子水平的研究进展 18-19 6 本论文研究的内容及意义 19-20 第二章 红曲霉菌株的诱变育种研究 20-34 1 前言 20-22 1.1 诱变育种的原理和方法 20 1.2 几种有效的诱变育种方法 20-22 2 材料与方法 22-27 2.1 材料 22-24 2.1.1 红曲霉菌株 22-23 2.1.2 实验用培养基 23 2.1.3 试剂及设备 23-24 2.2 实验方法 24-27 2.2.1 红曲霉菌株的活化 24 2.2.2 红曲霉液体种子的制作 24 2.2.3 红曲霉固态发酵 24 2.2.4 红曲米色价的测定 24-25 2.2.5 红曲霉色素产生周期曲线的制作 25 2.2.6 橘霉素标准曲线的制作 25 2.2.7 红曲中橘霉素含量的测定 25-26 2.2.8 红曲霉菌株的紫外线和氯化锂(LiCl)复合诱变 26-27 3 结果与分析 27-33 3.1 不同的红曲霉菌株产色素的差异 27-28 3.2 红曲霉 M.purpureus GX色素发酵时间的确定 28 3.3 橘霉素标准曲线 28-29 3.4 红曲霉菌株的紫外线和氯化锂(LiCl)复合诱变 29-30 3.4.1 孢子悬液的制备 29 3.4.2 紫外线照射时间的选择 29-30 3.4.3 氯化锂处理剂量的选择 30 3.5 紫外线和氯化锂的复合诱变的结果 30-32 3.6 突变菌株和原始菌株的形态对比 32-33 3.7 突变菌株的稳定性实验结果 33 4 讨论 33-34 第三章 利用最优回归设计法确定红曲霉固体发酵的最佳条件 34-54 1 前言 34 2 材料与方法 34-37 2.1 材料 34-35 2.2 实验方法 35-37 2.2.1 红曲霉菌株的活化 35 2.2.2 红曲霉液体种子的制作 35 2.2.3 红曲霉固态发酵 35 2.2.4 确定培养条件 35 2.2.5 二次饱和 D-最优设计法设计实验方案 35-37 2.2.6 多项式回归模型的建立 37 3 结果与分析 37-53 3.1 最优回归方程的确定 37-41 3.2 降维分析 41-52 3.2.1 实验因子单因素分析 41-48 3.2.2 实验因子间互作效应分析 48-52 3.3 最佳组合方案的确定 52 3.4 最佳组合的验证性试验 52-53 4 结论与讨论 53-54 第四章 真菌激发子对红曲霉色素代谢的影响 54-65 1 前言 54-58 1.1 激发子的种类和性质 54-56 1.2 激发子的作用 56-58 2 材料与方法 58-59 2.1 材料 58 2.2 实验方法 58-59 2.2.1 红曲霉菌株的活化 58 2.2.2 红曲霉液体种子的制作 58 2.2.3 红曲霉固体培养 58 2.2.4 红曲米色价的测定 58 2.2.5 激发子菌株的采集与分离 58-59 2.2.6 激发子粗提物的制备 59 2.2.7 激发子粗提物对红曲米固体发酵的处理 59 3 结果与分析 59-64 3.1 激发子菌株的采集与分离 59-61 3.2 激发子粗提物对红曲米固体发酵的处理结果 61-64 4 结论与讨论 64-65 致谢 65-66 参考文献 66-70 发表论文及参加学术活动情况 70-71 原创性声明 71 关于学位论文使用授权的声明 71
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中图分类: > 工业技术 > 化学工业 > 其他化学工业 > 发酵工业 > 酶制剂(酵素) > 其他
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