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游离棉酚对小白鼠泌尿系统的影响研究

作　者: 寇焕起
导　师: 潘晓亮
学　校: 石河子大学
专　业: 动物营养与饲料科学
关键词: 小白鼠棉酚肾小管上皮细胞
分类号: S865.13
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

本论文通过4个试验进行游离棉酚对小白鼠泌尿系统的影响研究。试验一不同浓度梯度游离棉酚对小白鼠体重和泌尿系统的影响研究。随机选取90只24．69±1．01g雄性昆明小白鼠，随机分为5组，O mg／kg”*d，40 mg，，kg‰*d，80 mg／kg‰*d，120 mg，，kg*d，160 mg／kg”利。预试期7d，正试期6周。观察试验过程中小鼠体质状况，称重，分别在第2周和第6周，采集各组小鼠。肾脏进行HE染色切片镜检。结果表明：饲喂棉酚3周内对小鼠体重增长的影响较小，后期对小鼠生长具有抑制作用；饲喂棉酚会引起小鼠肾脏出现肾间质出血、肾梗死、。肾颗粒变性坏死、肾小球毛细血管扩张，充血，出血等组织损伤。试验二棉酚对小白鼠血清中钾镁钙磷的影响研究。在试验第2周和第6周，采集各组小鼠血液，用全自动生化分析仪检测血清中钾、镁、钙、磷的含量。结果显示，40-120mg／kg”*d的棉酚浓度饲喂雄性昆明小白鼠，会引起小白鼠低血钾，在该棉酚浓度范围内，对各组小鼠血清中钙、镁、磷的含量影响差异不显著。试验三小白鼠肾小管上皮细胞原代分离培养方法的建立。用胶原酶Ⅳ和胰蛋白酶消化法，从幼鼠和成年鼠分离培养昆明小白鼠原代。肾小管上皮细胞，用一抗为1：400cyt。teratin 18，二抗为l：100的山羊抗小鼠的抗体对其进行特异性鉴定，结果表明：成年鼠肾脏分离效果比幼鼠好；消化10min得到的细胞产量较多；胶原酶Ⅳ消化效果较好，比胰蛋白酶消化法分离的细胞贴壁早，且贴壁数量多；肾小管上皮细胞鉴定结果为阳性。试验四棉酚对小白鼠肾小管上皮细胞的影响研究。对肾小管上皮细胞按照添加棉酚浓度分成14个组，分别添加Oug/m1、10001ag/ml、500ug/ml、250ug/ml、125ugml、62.5ug/m1、31.3ug/m1、10001ag/m1的左旋棉酚和消旋棉酚。分别在棉酚接触细胞24h，48h，72h和96h时，用MTT法检测细胞凋亡率，用试剂盒检测培养液中H1]L酶活力，用超微量ATP酶试剂盒测细胞内cMA酶和NKA活力。结果表明：细胞凋亡率与消旋棉酚浓度和作用时间具有明显依从性，即细胞凋亡率随消旋棉酚浓度的升高而增大，随棉酚作用时间延长而增大；左旋棉酚只有在作用48h时，细胞凋亡率与棉酚浓度和作用时间具有明显依从性。LDH泄漏量与棉酚接触。肾小管上皮细胞的时间具有依从性，与棉酚浓度没有依从关系，但各浓度棉酚都会造成不同程度的细胞损伤。细胞内NKA活性与棉酚浓度和作用时间具有相关性，细胞酶NKA活力随棉酚作用时间的延长而变小，随棉酚浓度的减小而增大。左旋棉酚对细胞NKA活力的影响比消旋棉酚大。棉酚对cMA的影响没有时间浓度依从性。结论：小白鼠饲喂游离棉酚，对小白鼠增重具有抑制作用，对小鼠。肾脏组织产生损害作用，并造成小白鼠低血钾。用棉酚接触。肾小管上皮细胞，左旋棉酚和消旋棉酚分别能够使细胞凋亡损伤，导致细胞HDL的泄露，NKA和cMA酶活性的降低，其中左旋棉酚对细胞对细胞NKA活力的影响较大。

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-12
论文部分缩写的中英文对照词表  12-13
前言  13-15
  1. 研究目的和意义  13
  2. 论文立论依据  13-14
  3. 论文总体研究思路  14-15
第一章综述  15-26
  1. 棉酚  15-16
    1.1 棉酚的理化性质  15-16
    1.2 棉酚的植物来源  16
  2 棉酚在动物体内的代谢过程  16
  3 棉酚对动物机体的影响  16-19
  4 棉酚对细胞的作用机理  19-23
    4.1 棉酚对动物细胞中酶活性的影响  19-21
    4.2 棉酚对动物机体蛋白质代谢的干扰  21
    4.3 棉酚动物机体内离子的影响  21-23
  5. 棉酚对体外培养细胞的影响研究进展  23-25
    5.1 棉酚对生殖细胞的影响研究进展  23-24
    5.2 棉酚对癌细胞的作用研究进展  24
    5.3 棉酚肾细胞的作用研究进展  24-25
  6. 棉酚在其它方面的研究进展  25-26
    6.1 棉酚具有抗病毒作用和免疫抑制作用  25
    6.2 棉酚在妇科临床方面的应用  25-26
第二章实验部分  26-52
  试验一同浓度梯度棉酚对小白鼠增重及肾脏组织的影响  26-33
    1 试验材料方法  26-28
      1.1 试验设备  26
      1.2 试验设计  26
      1.3 试验饲粮及营养水平  26-27
      1.4 实验动物的饲养管理  27
      1.5 试验方法  27-28
      1.6 统计分析  28
    2 结果与讨论  28-32
      2.1 预试期每组小鼠日采食量  28-29
      2.2 小鼠体重  29
      2.3 饲喂棉酚后小白鼠体质状况的变化  29-30
      2.4 饲喂棉酚对小白鼠肾脏组织的影响  30-32
    3 小结  32-33
  试验二酚对小白鼠血清中钾镁钙磷的影响研究  33-37
    1. 材料方法  33
      1.1 试验动物  33
      1.2 试验设备  33
      1.3 试验方法  33
    2. 饲喂棉酚两周后试验结果  33-35
      2.1 正试饲养试验饲喂两周后第一次采样结果  33-34
      2.2 饲喂六周后采样结果  34-35
    3 结果讨论与分析  35-36
    4 小结  36-37
  试验三白鼠肾小管上皮细胞原代分离培养  37-41
    1. 试验材料  37
      1.1 试验动物  37
      1.2 试验试剂  37
      1.3 试验器材设备  37
    2. 试验方法  37-38
      2.1 胶原酶消化法  37-38
      2.2 胰蛋白酶消化法  38
      2.3 肾细胞原代培养及传代  38
      2.4 肾小管上皮细胞的鉴定  38
    3. 结果  38-40
      3.1 分离细胞的生长及传代观察  38-39
      3.2 胶原酶和胰蛋白酶消化结果  39
      3.3 不同消化时间对细胞的影响  39
      3.4 不同日龄的小鼠对细胞的影响  39
      3.5 细胞鉴定结果  39-40
    4 讨论  40
    5. 小结  40-41
  实验四酚对小白鼠肾小管上皮细胞的影响研究  41-52
    1 试验材料  41
      1.1 试剂  41
      1.2 仪器设备  41
    2 试验方法  41-43
      2.1 细胞计数与转板  41-42
      2.2 棉酚影响细胞各指标的检测  42-43
      2.3 结果处理  43
    3. 结果  43-49
      3.1 加入棉酚后细胞形态变化  43
      3.2 棉酚对细胞凋亡的影响  43-46
      3.3 棉酚对细胞 LDH 的影响  46-47
      3.4 超微量 ATP 酶的检测  47-49
    4 讨论  49-52
      4.1 棉酚对细胞凋亡的影响  49-50
      4.2 棉酚对细胞酶的影响  50-52
第三章论文结论、创新点与研究展望  52-53
  1 结论  52
  2 创新点  52
  3 研究展望  52-53
参考文献  53-58
作者简介  58-59
致谢  59-60
导师评阅表  60

游离棉酚对小白鼠泌尿系统的影响研究

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