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固定化N-乙酰-D神经氨酸醛缩酶的制备及生化性质研究

作　者: 杨茂区
导　师: 冯磊
学　校: 浙江大学
专　业: 营养与食品卫生学
关键词: 唾液酸 N-乙酰-D-神经氨酸 醛缩酶 固定化
分类号: TQ464.8
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要


【目的】对一株高产Neu5Ac醛缩酶的诱导型基因工程菌株E. coli DH5α/pRY1进行发酵产酶,并对酶进行固定化,对固定化酶进行生化性质的测定分析,为固定化Neu5Ac醛缩酶应用于工业生产神经氨酸奠定基础。 【方法】用含TB培养基的发酵罐对该菌株进行发酵。发酵条件为:通气1.4vvm,搅拌550rpm,先37℃培养1～2小时,待A600>1.0时,降温至22℃,分两次添加乳糖至终浓度为1.5%,继续发酵18～20小时,出料,4℃,5000rpm离心收集菌体。菌体冷冻过夜后,用pH7.5磷酸缓冲液悬浮,超声波破碎,测定酶液在不同破碎条件下的酶活,确定其最佳破碎条件。破碎后悬浮液经15000rpm,4℃离心即得无细胞上清粗酶液。通过对粗酶液热变性处理,对酶进行纯化。用Eupergit? C环氧树脂对酶进行固定化,以蛋白/干载体比例、温度、时间为三因素进行三因素三水平的正交试验,确定最佳固定化条件。对制得的固定化酶,研究其酶动力学性质,测定温度和pH对固定化酶活性的影响。对固定化酶进行贮存稳定性和重复使用稳定性试验。 【结果】20L发酵液得到湿菌体723g。菌体超声波破碎的最佳条件为:功率

全文目录


缩略语  4-5
中文摘要  5-7
英文摘要  7-10
前言  10-13
材料和方法  13-20
结果与分析  20-29
讨论  29-32
结论  32-33
参考文献  33-36
综述  36-44
致谢  44

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中图分类: > 工业技术 > 化学工业 > 制药化学工业 > 生物制品药物的生产 > 酶及辅酶
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