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河川沙塘鳢（Odontobutis potamophila）在太湖环境雌激素检测中的应用研究

作　者: 吴鹰
导　师: 周忠良
学　校: 华东师范大学
专　业: 动物学
关键词: 太湖河川沙塘鳢(Odontobutis potamophila(Günther)) 环境雌激素卵黄磷脂蛋白卵黄蛋白原酶联免疫吸附 17β-雌二醇（E2）苯并花(BaP) 壬基酚(NP) 生物标志物
分类号: X524
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

太湖是长三角地区最大的淡水湖，是上海和浙东地区的主要水源地。近年来太湖的污染状况引起了全社会的广泛关注。太湖中丰富的野生鱼类资源是对其进行环境监测时最有效的指示生物。河川沙塘鳢（Odontobutis potamophila（Günther），Gobbid fish）属鲈形目，塘鳢科，俗名塘鳢鱼，为淡水底栖小型野生肉食性鱼类，分布于我国长江水系中下游、钱塘江、闽江等水系。该物种处于水生生态系统食物链的较高层级，对环境中的污染物具有一定的生物富集效应。本实验室对太湖地区河川沙塘鳢的食性、生长、繁殖等生物学性质有较详细的研究，故本文选用该种鱼作为模型动物，建立了环境内分泌干扰物的实验室和太湖地区野外监测方法。以期为太湖地区以及其他水体环境污染监测研究提供基础资料和技术。利用雄鱼、幼鱼血清卵黄蛋白原（Vitellogenin，Vtg）水平变化作为水环境中类雌激素物质监测的生物标志物已经成为一种国际通行的研究方法。但是，Vtg量少，分离纯化难度较大，使该方法在野外研究和推广方面受到制约。本文利用Vtg的衍生蛋白，卵黄脂磷蛋白（LV）为抗原，建立了一套监测河川沙塘鳢血浆Vtg的ELISA方法。通过DEAE-Cellulose DE52离子交换层析和Sephacryl S-300凝胶层析纯化了河川沙塘鳢卵黄磷脂蛋白（LV）和卵黄蛋白原（Vtg）。LV的分子量约为440kD，卵黄脂磷蛋白的3个亚基团分子量大小分别约为：105kD、41.18kD、31.30kD。Vtg的分子量约为556.5kD，主要亚基大小为110kD。利用河川沙塘鳢卵黄脂磷蛋白（LV）制备抗血清，检测其与Vtg的交叉反应，发现，LV和Vtg的分子结构虽然不同，但是仍有很好的免疫共性。为此，以兔抗LV血清（an-LV）为一抗，建立了间接竞争ELISA检测方法。此法的最低检测下限为40ng／mL，有效工作区间为160～1280ng／mL，在此范围内有很好的线性关系。以雌二醇（E₂）和壬基酚（NP）为环境内分泌干扰参照物在实验室诱导河川沙塘鳢雄性个体产生Vtg，用自建的ELISA方法检测，显示出良好的剂量一效应关系。E₂的最低有效诱导浓度是0.001mg／kg（E₂／鱼体重），NP的最低有效浓度是50mg／kg（NP／鱼体重）。首次利用实验室建立的监测方法，对太湖东山、周铁、望亭等地水域的河川沙塘鳢进行了环境雌激素类污染效应检测，在东山和周铁等地的样品中发现有阳性反应。2005年在东山水域进行了为期一年的采样检测，其中在3、4月份分别有50％和35％样品呈阳性。说明该地区水体中存在有雌激素类物质。壬基酚（NP）和苯并芘（BaP）的联合暴露显示，BaP能导致河川沙塘鳢雄性个体血清E₂含量上升，并抑制NP诱导雄鱼血浆Vtg表达，同时还可诱导肝脏EROD酶活性和抑制肝脏SOD酶活性，实验中的最低有效浓度组合均为2mg／kg的BaP（BaP／鱼体重）+200mg／kgNP（NP／鱼体重）。

全文目录

第一章：前言  11-14
第二章：河川沙塘鳢卵黄蛋白原(Vtg)与卵黄磷脂蛋白(LV)的分离纯化及部分生化性质的研究  14-21
  1 引言  14
  2 材料和方法  14-16
  3 结果  16-19
  4 讨论  19-21
第三章：河川沙塘鳢卵黄脂磷蛋白多克隆抗体的制备以及卵黄蛋白原ELISA检测方法的建立  21-26
  1 引言  21
  2 材料和方法  21-23
  3 结果  23-24
  4 讨论  24-26
第四章：雌二醇、壬基酚对河川沙塘鳢卵黄蛋白原的诱导  26-31
  1 引言  26
  2 材料和方法  26-28
  3 结果  28-29
  4 讨论  29-31
第五章：太湖水域环境内分泌物干扰物对河川沙塘鳢影响的初步调查  31-36
  1 引言  31
  2 材料和方法  31-32
  3 结果  32-35
  4 讨论  35-36
第六章：壬基酚与苯并芘联合暴露对河川沙塘鳢多个生化指标的影响  36-45
  1 引言  36
  2 材料和方法  36-39
  3 结果  39-43
  4 讨论  43-45
附录  45-59
  生物标志物概述  45-54
  文中常用试剂配方表  54-57
  电泳胶配方  57-59
参考文献  59-65
后记  65

河川沙塘鳢（Odontobutis potamophila）在太湖环境雌激素检测中的应用研究

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