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β arestins转基因小鼠制备、建系及功能研究初探

作　者: 谭芳
导　师: 哈斯阿古拉
学　校: 内蒙古大学
专　业: 微生物学
关键词: G蛋白偶联受体 β-arrestins 转基因小鼠吗啡耐受空间记忆开场行为 Morris水迷宫
分类号: Q78
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

在G蛋白偶联受体(GPCRs,7TMRs)信号转导中,经典的理论认为β—arrestins使激活的受体与G蛋白解偶联(脱敏),阻断了受体信号转导,进而导致受体内吞。近来的研究发现β—arrestins不仅终止GPCRs的信号,还可以介导GPCRs的内吞和运输,引发GPCRs的新信号,以及介导GPCRs和其它信号通路间的交流。为了更进一步研究β-arrestins在活体水平上的功能定位,我们运用转基因技术,通过体外构建目的基因载体,原核期胚胎的显微注射,再进行PCR和Southern Blot鉴定,最终制备了human β arrestin Ⅰ overexpression mice, human β arrestin Ⅱ overexpression mice, mouse β arrestin Ⅰ RNAi mice和mouse β arrestin Ⅱ RNAi mice四种转基因鼠。经过实时荧光定量PCR鉴定纯合小鼠。自此,系统便初步建立起来。然后,我们进行RT-PCR和免疫组化试验,进行蛋白表达鉴定。阿片受体属于GPCRs超家族。因此体内过量表达β—arrestins有可能引起阿片成瘾的变化。于是我们采用甩尾法研究转基因小鼠对吗啡耐受的变化。由于海马区外源基因的表达,我们运用开场行为和Morris水迷宫实验证明其对空间记忆的影响。

全文目录

引言  8-9
第一章 hβarrestin Ⅱ overexpression转基因小鼠的制备和纯合子的建立  9-24
  一、材料与方法  9-18
    (一) 材料  9-10
      1．质粒  9
      2．工具酶  9-10
      3．主要生化试剂  10
      4． Sourthern杂交试剂  10
      5．其他分子生物学仪器  10
    (二) 方法  10-18
      1． Arr2O小鼠载体的构建和显微注射用 DNA的制备  10
      2．显微注射  10-11
      3．小鼠基因组 DNA的提取  11-12
      4．转基因阳性鼠鉴定  12-15
        4．1 PCR筛选  12
        4．2 Southern杂交  12-15
      5． Arr2O小鼠的蛋白表达鉴定  15-17
        5．1 RT-PCR鉴定  15-16
        5．2 免疫组化鉴定  16-17
      6．用实时荧光定量 PCR的方法鉴定纯和转基因鼠  17-18
  二、结果与讨论  18-24
    (一) 结果  18-22
      1．显微注射用 DNA的制备  18
      2．显微注射与转基因鼠建立  18-19
      3．转基因鼠的 PCR鉴定  19
      4．转基因鼠的 Southern杂交鉴定  19-20
      5． RT-PCR鉴定基因转录情况  20-21
      6．免疫组化分析转基因蛋白表达的情况  21
      7． Realtime PCR鉴定纯合子  21-22
    (二) 讨论  22-24
第二章转基因小鼠的功能研究  24-31
  第一节阿片成瘾作用探讨-tolerance(tail flick)  24-27
    一、材料与方法  24
      (一) 材料  24
        1．实验动物和分组  24
        2．仪器  24
      (二) 方法  24
        1．急性吗啡甩尾实验  24
        2．长时吗啡甩尾实验  24
    二、结果与讨论  24-27
      (一) 结果  24-26
        1．急性吗啡耐受  24-25
        2．长时吗啡耐受  25-26
      (二) 讨论  26-27
  第二节转基因小鼠的自主活动和空间记忆研究  27-31
    一、材料与方法  27-28
      (一) 材料  27
        1．实验动物和分组  27
        2．仪器  27
      (二) 方法  27-28
        1．自主活动测定  27
        2．空间记忆的研究--Morris水迷宫  27-28
    二、结果与讨论  28-31
      (一) 结果  28-30
        1．自主活动  28-29
        2． Morris水迷宫  29-30
      (二) 讨论  30-31
参考文献  31-32
文献综述  32-37
参考文献  37-38
在读期间发表的文章  38-39
致谢  39

β arestins转基因小鼠制备、建系及功能研究初探

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