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单宁酸与胰蛋白酶和牛血清白蛋白相互作用的研究

作　者: 李海鹏
导　师: 赵春贵
学　校: 山西大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 单宁酸 胰蛋白酶 牛血清白蛋白 酶活力 荧光光谱法
分类号: Q946
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
下　载: 340次
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内容摘要


第一章：简要概述了单宁的研究现状及发展趋势、单宁与蛋白作用的研究进展及单宁与蛋白作用的理论，提出了本文立题的意义及研究内容。 第二章：采用荧光光谱法研究了TA与Trypsin的相互作用。探索了TA与Trypsin作用的基本条件。发现TA与Trypsin作用的过程中存在快反应和慢反应两个过程。针对两个反应过程，用滴定和作用24小时两种方式研究了不同pH值二者的相互作用。在各pH值TA对Trypsin的荧光均具有较强的猝灭作用，且都引起Trypsin最大发射峰的峰位发生红移；TA对Trypsin的猝灭为静态猝灭过程；通过计算求得了不同pH值的表观结合常数KA及结合位点数n；并得出不同pH时TA与Trypsin作用力类型不同。 第三章：应用紫外分光光度法研究了TA对Trypsin酶活力的影响。结果表明TA能迅速抑制Trypsin的酶活力。通过双倒数作图法，求得Trypsin的米氏常数Km值为1.7×10-5mol·L-1；TA对Trypsin酶活性抑制类型为竞争性和非竞争性的混合型抑制；抑制常数Ki、Ki′分别为4.55×10-6mol·L-1，6.50×10-5mol·L-1；并求得了不同TA浓度时的VmappKmapp。表明TA不仅能与Trypsin结合猝灭其荧光，且对其酶活性有较强的抑制作用。由紫外可见光谱法计算所得TA与Trypsin作用的亲和常数（1／Ki）与荧光光谱法所得TA与Trypsin作用的KA结果较一致。 第四章：应用荧光光谱法在25℃，pH7.4时研究了TA与模型蛋白BSA的相互作用。结果表明TA与BSA作用也可以分为两个过程。而且TA对BSA具有较强的荧光猝灭作用，能使得蛋白的最大发射峰发生红移，说明能够通过改变蛋白质的构象进而改变色氨酸的疏水环境。且经研究证实TA对BSA的荧光猝灭属静态猝灭过程。25℃时二者在快反应和慢反应过程中作用的结合常数KA分别为3.16×105L·mol-1和3.55×108L·mol-1且结合位点数n分别为0.86和1.42。热力学参数ΔH＞0，ΔS＞0，判断作用力类型主要为疏水作用。此外，按照非辐射能量转移理论，计算了TA与BSA中212位色氨酸残基间的距离，分别为2.21 nm（RRS）和1.97 nm（SRS），结合部位为BSA的Site Ⅱ的

全文目录


中文摘要  9-11
ABSTRACT  11-13
缩略语  13-14
第一章 概论  14-33
  1.1 单宁的研究现状及发展趋势  14-18
    1.1.1 单宁概述  14
    1.1.2 单宁的概念  14-15
    1.1.3 单宁的分类  15-16
    1.1.4 单宁的化学特性  16
    1.1.5 单宁的生理活性与不利影响  16-18
  1.2 单宁与蛋白作用的研究进展  18-26
    1.2.1 概述  18-19
    1.2.2 单宁与蛋白作用的研究现状  19
    1.2.3 单宁与蛋白作用的理论  19-22
    1.2.4 影响多酚-蛋白质结合的因素  22
    1.2.5 多酚-蛋白质反应的作用力  22-26
  1.3 荧光光谱法  26
  1.4 本文研究内容及其意义  26-27
  参考文献  27-33
第二章 TA与Trypsin相互作用的研究  33-44
  2.1 引言  33-34
  2.2 实验部分  34
    2.2.1 仪器和试剂  34
    2.2.2 实验方法  34
  2.3 结果与讨论  34-42
    2.3.1 Trypsin的激发光谱和发射光谱  34-35
    2.3.2 盐离子浓度的影响  35
    2.3.3 pH值对反应体系的影响  35-36
    2.3.4 离心对TA与Trypsin作用荧光强度的影响  36-37
    2.3.5 作用时间对反应体系的影响  37
    2.3.6 TA对Trypsin的荧光的猝灭作用  37-38
    2.3.7 TA对Trypsin荧光猝灭的机理  38-39
    2.3.8 TA与Trypsin结合常数及结合位点数的计算  39-41
    2.3.9 TA与Trypsin作用的共振光散射光谱  41-42
  2.4 小结  42
  参考文献  42-44
第三章 TA对Trypsin酶活性的影响  44-52
  3.1 引言  44
  3.2 实验部分  44-45
    3.2.1 仪器和试剂  44-45
    3.2.2 实验方法  45
  3.3 实验结果  45-51
    3.3.1 Trypsin比活力的计算  45
    3.3.2 反应体系中不同浓度TA对Trypsin活性的影响  45-46
    3.3.3 TA对于Trypsin活性的抑制随时间的变化  46
    3.3.4 米氏常数K_m的测定  46-48
    3.3.5 TA对Trypsin抑制类型的判定及抑制常数的计算  48-51
  3.4 小结  51
  参考文献  51-52
第四章 荧光光谱分析法研究TA与BSA的相互作用  52-63
  4.1 引言  52-53
  4.2 实验部分  53
    4.2.1 仪器与试剂  53
    4.2.2 实验方法  53
  4.3 结果与讨论  53-59
    4.3.1 作用时间对TA-BSA荧光强度的影响  53-54
    4.3.2 TA对BSA的荧光猝灭作用  54-55
    4.3.3 TA与BSA结合反应的荧光猝灭机理的研究  55-56
    4.3.4 TA与BSA结合常数及结合位点数的计算  56-57
    4.3.5 TA与BSA作用的热力学研究  57-58
    4.3.6 荧光给体-受体间的距离的确定  58-59
  4.4 小结  59-60
  参考文献  60-63
第五章 疏水荧光探针(TNS)法研究TA与BSA的相互作用  63-72
  5.1 引言  63
  5.2 实验部分  63-64
    5.2.1 仪器和试剂  63-64
    5.2.2 实验方法  64
  5.3 结果与讨论  64-71
    5.3.1 λex为295nm,TNS与BSA-TA复合物的作用  64-67
    5.3.2 λex为322nm,TNS与BSA-TA复合物的作用  67-68
    5.3.3 TA对BSA-TNS体系荧光强度的影响  68-71
  5.4 小结  71
  参考文献  71-72
第六章 TA与Trypsin及BSA作用共振光散射光谱的比较  72-77
  6.1 引言  72
  6.2 实验部分  72-73
    6.2.1 仪器和试剂  72
    6.2.2 实验方法  72-73
  6.3 结果与讨论  73-75
    6.3.1 TA与Trypsin作用的共振光散射光谱  73-74
    6.3.2 TA与BSA作用的共振光散射光谱  74-75
  6.4 小结  75-76
  参考文献  76-77
第七章 结论与展望  77-78
附录  78-79
致谢  79-80
承诺书  80

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中图分类: > 生物科学 > 植物学 > 植物生物化学
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