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人乳铁蛋白（hLF）cDNA的克隆及生物信息学分析

作　者: 蔡佩玲
导　师: 童英
学　校: 四川大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 人乳铁蛋白cDNA 基因克隆 DNA序列氨基酸序列同源性分析理化性质
分类号: R346
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

乳铁蛋白(Lactoferrin,LF)是调节动物体液内自由铁水平的转铁蛋白族中最重要的成员。它是一种分泌性蛋白,广泛存在于哺乳动物的乳汁、动物体的泪液、唾液、汗液、胆汁、精液,气管和鼻腔分泌物以及胰液、血浆、羊水、小肠液、滑膜液和嗜中性粒白细胞中。为了研究不同个体或组织的hLF的碱基及氨基酸序列是否存在差异和进一步探讨该基因的异源表达特性,从正常人外周血液中分离中性粒白细胞(WBC),提取总RNA;以Oligo(dT)为引物合成第1条cDNA链,将LF基因分成1.5和0.8kb 2个cDNA片段进行扩增,分别获得预期的cDNA片段,将其插入pMD18-T载体中,得到2种重组质粒,经鉴定后再将2个cDNA片段切下来,与巴氏毕赤酵母表达载体pPICZα-A相连,获得含有完整LF基因的重组表达质粒pPICZα-hLF。对所克隆到的hLF cDNA序列进行测定,结果表明,其cDNA全长为2,136bp,编码711个氨基酸残基。DNA序列与登录的来自人不同组织的hLF序列进行比对,结果表明,碱基同源性达99%,有21个碱基发生了变化,其中有7个碱基变异不导致氨基酸的改变;氨基酸同源性为96～97%。利用Vector NTI、DNAMAN和DNA Tools等生物软件对hLF进行生物信息学分析。分析结果表明:(1)hLF的二级结构以α螺旋和β-折叠为主,二者沿蛋白质的氨基酸顺序交替排列,且α-螺旋大大多于β-折叠;(2)三级结构在二级结构的基础上折叠成2个基本相等的叶,每个叶进一步形成2个结构域和

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图形目录  5-6
表格目录  6-7
研究论文：人乳铁蛋白(hLF)cDNA的克隆及生物信息学分析  7-59
  中文摘要  7-9
  英文摘要  9-11
  1 引言  11-13
  2 材料和方法  13-30
    2.1 实验材料  13-17
    2.2 实验方法  17-30
  3 结果  30-51
    3.1 hLF cDNA的扩增  30-31
    3.2 hLF cDNA的克隆  31-33
    3.3 hLF全长cDNA的连接及表达质粒的构建  33-35
    3.4 hLF的cDNA序列分析  35-38
    3.5 hLF二级结构的预测  38-44
    3.6 hLF三级结构的预测  44-45
    3.7 hLF蛋白的氨基酸序列的同源性比对  45-46
    3.8 hLF的性质与结构预测  46-51
      3.8.1 蛋白质分子量及等电点  46-47
      3.8.2 蛋白质的氨基酸组成  47-48
      3.8.3 蛋白质的疏水区预测  48-51
  4 讨论  51-54
    4.1 hLF碱基同源性  51
    4.2 hLF二级结构的预测  51-52
    4.3 hLF三级结构的预测  52
    4.4 hLF氨基酸的同源性  52-53
    4.5 hLF的氨基酸组成  53
    4.6 hLF在毕赤酵母中的表达  53-54
  小结  54-55
  参考文献  55-59
文献综述：乳铁蛋白研究进展  59-102
  摘要  60-61
  1 LF的来源  61-62
  2 LF的分子结构及理化性质  62-65
    2.1 分子结构  62-64
    2.2 理化性质  64-65
  3 LF的生物学功能及作用机理  65-76
    3.1 结合功能  65
    3.2 促进铁吸收  65-67
    3.3 抑菌作用  67
    3.4 抗病毒作用  67-71
    3.5 调节免疫  71-73
    3.6 促进肠道及肠道内双歧杆菌生长  73
    3.7 抗氧化  73
    3.8 抗感染活性  73-74
    3.9 杀菌作用  74-75
    3.10 基因调节作用  75
    3.11 LF的其他功能  75-76
  4 LF的测定方法  76-80
    4.1 酶联免疫吸附法(ELISA法)  76-77
    4.2 高效液相色谱法(HPLC)  77-78
    4.3 分光光度法  78
    4.4 放射免疫(RIA)扩散法  78
    4.5 铁蛋白免疫印迹法  78-79
    4.6 免疫组织化学染色法  79-80
  5 LF的分离与纯化  80-84
    5.1 吸附色谱法  80-81
    5.2 离子交换色谱法  81
    5.3 亲和色谱法  81-82
    5.4 固定化单克隆抗体法  82
    5.5 超滤法  82-83
    5.6 等电点沉淀和膜分离集成法  83
    5.7 膜分离和色谱组合法  83
    5.8 盐析和有机溶剂沉淀法  83-84
    5.9 金属螯合色谱法  84
  6 基于LF的功能性实验  84-85
    6.1 动物实验  84-85
    6.2 人体实验  85
    6.3 防治肝炎  85
  7 人LF基因研究进展  85-89
  8 LF的应用展望  89-93
    8.1 猪饲料工业  89-90
    8.2 牛饲料工业  90
    8.3 鱼类疾病防治  90-91
    8.4 乳品工业  91
    8.5 医学上  91-93
  参考文献  93-102
致谢  102-103
在读期间论文发表情况  103-104
声明  104

人乳铁蛋白（hLF）cDNA的克隆及生物信息学分析

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