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体外诱导人骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化

作　者: 韩永生
导　师: 褚俊；翟志敏
学　校: 安徽医科大学
专　业: 内科学
关键词: 骨髓祖代细胞/细胞学骨髓细胞/药物作用间质干细胞/细胞学免疫组织化学细胞分化/药物作用显微镜检查电子心肌/细胞学脱氧胞苷
分类号: R329
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
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内容摘要

目的:(1)通过体外分离、培养人骨髓间充质干细胞(hMSCs),观察其生物学特性;(2)对培养的hMSCs行体外药物诱导,促其向心肌样细胞分化。方法:采用Ficoll淋巴细胞分离液分离人骨髓单个核细胞,所获取的细胞置于含10%胎牛血清的L-DMEM中培养,通过传代获得纯度较高的hMSCs,应用流式细胞仪鉴定hMSCs。在第四代传代时加入5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L 5-杂氮胞苷对hMSCs进行诱导,24h后更换为完全培养基继续培养。分别在诱导后第2～8W利用结蛋白抗体、心钠素抗体以及闰盘蛋白抗体进行免疫组化染色,并于第2～4W利用超薄切片透射电镜观察诱导细胞的超微结构。结果:诱导前hMSCs表面抗原CD34、CD45、CD31阴性,CD90为弱阳性,经反复多次传代后(15代以上),细胞形态及抗原表达无改变,始终保持未分化状态和稳定扩增。利用5-杂氮胞苷对其诱导后第2W始,免疫组化染色发现细胞结蛋白、闰盘蛋白的阳性率为20%～30%,心肌细胞特异性抗原心钠素也为阳性,不同浓度5-杂氮胞苷诱导组之间无显著差异。超薄切片透射电镜观察发现这些细胞的细胞核位于中央,少数细胞为双核或者多核,细胞核周围聚集有丰富的房性颗粒样结构,直径为100～200nm;部分细胞中可见细小的肌丝样结构。结论:(1)以Ficoll分离液分离人骨髓单个核细胞,同时利用hMSCs贴壁生长的特性,可以有效获得hMSCs。(2)hMSCs具有很强的自我复制能力,并能够在连续的体外培养过程中保持未分化状态。(3)hMSCs具有多向分化潜能,在体外利用5-杂氮胞苷可以诱导hMSCs向心肌样细胞分化。

全文目录

一、英文缩略词表  5-6
二、中文摘要  6-7
三、英文摘要  7-8
四、正文  8-37
  1．引言  8-14
  2．材料与方法  14-19
  3．实验结果  19-26
  4．讨论  26-31
  5．结论  31-32
  6．文献  32-37
五、附录  37-38
六、致谢  38-39
七、综述  39-47
  1．正文  39-46
  2．文献  46-47

体外诱导人骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化

内容摘要

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