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低浓度毒死蜱对发育期神经细胞极性复合体的影响

作　者: 李传武
导　师: 陈晓萍
学　校: 浙江工业大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 毒死蜱神经发育 Par6 aPKC
分类号: R114
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 28次
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内容摘要

在有机磷农药毒死蜱的毒性研究中发现,毒死蜱具有一类特殊的神经发育毒性,能引发神经细胞的细微改变。但迄今为止,很少从细胞极性角度展开研究。Par极性复合体是与细胞极性调节关系密切的一类蛋白质。本文研究低浓度毒死蜱对发育期胚胎神经细胞极性复合体的影响。通过构建孕鼠模型,在小鼠胚胎神经发育期E7.5-E11.5连续5天皮下注射5mg/kg的毒死蜱,对照组注射等体积二甲基亚砜。在E12、E14、E16三个时间点,处死妊娠母鼠,取出胚胎,从胚胎整体形态、侧脑室VZ区细胞形态、体视学参数、极性蛋白Par6和aPKC表达,分析低浓度毒死蜱对发育期神经细胞极性和极性复合体的影响,结果如下:(1)低浓度毒死蜱对E12、E14、E16小鼠胚胎整体形态未产生明显影响,不影响胚胎存活率,但能增加E14、E16小鼠胚胎体重和头围;(2)DiI染色发现,毒死蜱暴露后的胚胎VZ区放射状胶质细胞空隙变大,细胞排列紊乱,原有的细胞极性发生改变。体视学分析发现毒死蜱引起细胞比表面降低,表面积密度、体积密度增加,说明毒死蜱导致放射状胶质细胞肿胀;(3)免疫荧光染色分析发现,毒死蜱的暴露影响神经发育期VZ区细胞Par6和aPKC表达,Par6和aPKC表达在E12和E16发生降低,在E14Par6表达无明显变化,而aPKC有所增加。研究结果表明,低浓度毒死蜱在胚胎早期的暴露,导致发育期VZ区细胞极性排列紊乱,极性蛋白Par6和aPKC表达发生改变。

全文目录

摘要  3-5
ABSTRACT  5-10
符号说明  10-11
第一章文献综述  11-29
  1.1 引言  11
  1.2 有机磷农药的一般毒性机制和神经发育毒性  11-16
    1.2.1 有机磷农药的一般毒性机制  11-12
    1.2.2 有机磷农药对细胞水平的神经发育毒性  12-14
    1.2.3 有机磷农药对脑内神经递质系统的远期影响  14-15
    1.2.4 有机磷农药对行为认知能力的远期影响  15
    1.2.5 人群流行病学调查研究  15-16
  1.3 神经发育中的细胞极性  16-17
  1.4 极性蛋白复合体  17-21
    1.4.1 Par 极性蛋白的发现  17
    1.4.2 极性蛋白的分类与结构  17-21
      1.4.2.1 极性蛋白复合物Par6/Par3/PKC 的结构  17-18
      1.4.2.2 极性蛋白Par3  18-19
      1.4.2.3 极性蛋白Par6  19-20
      1.4.2.4 极性蛋白aPKC  20-21
  1.5 极性蛋白与细胞极性  21-27
    1.5.1 细胞的前/后极性  21-23
      1.5.1.1 线虫中的细胞前后极性  21-22
      1.5.1.2 果蝇中的细胞前后极性  22-23
    1.5.2 细胞的顶/底极性  23-27
      1.5.2.1 果蝇的细胞顶-底极性  24-25
      1.5.2.2 哺乳动物的细胞顶-底极性  25-27
  1.6 极性蛋白与细胞的增殖与分化  27
  1.7 神经发育毒与细胞极性改变  27-28
  1.8 研究背景与意义  28
  1.9 研究内容与创新点  28-29
第二章低浓度毒死蜱对发育期胚胎的一般毒性  29-35
  2.1 材料和方法  30-31
    2.1.1 试剂  30
    2.1.2 溶液配制  30
    2.1.3 实验动物处理和分组  30-31
    2.1.4 定时胚胎的获取  31
    2.1.5 数据拍照与统计分析  31
  2.2 结果分析  31-33
    2.2.1 毒死蜱对孕鼠一般状况的影响  31
    2.2.2 毒死蜱对发育期胚胎整体外观的影响  31-32
    2.2.3 毒死蜱对发育期胎鼠体重的影响  32-33
    2.2.4 毒死蜱对发育期胎鼠头围的影响  33
  2.3 讨论  33-35
第三章低浓度毒死蜱对神经前体细胞基本形态的影响  35-48
  3.1 材料和方法  36-41
    3.1.1 试剂  36
    3.1.2 主要溶液配制  36-37
    3.1.3 主要实验仪器  37-38
    3.1.4 实验动物处理和分组  38
    3.1.5 定时胚胎的获取  38
    3.1.6 石蜡常规切片步骤  38-39
    3.1.7 胚胎侧脑室HE 染色  39-40
    3.1.8 胚胎脑切片DiI 染色  40
    3.1.9 拍照及数据统计分析  40
    3.1.10 放射状胶质细胞胞体视学参数测量  40-41
  3.2 结果分析  41-46
    3.2.1 毒死蜱对E12 VZ 区细胞形态的影响  41-42
    3.2.2 毒死蜱对E14 VZ 区细胞形态的影响  42
    3.2.3 毒死蜱对E16 VZ 区细胞形态的影响  42-43
    3.2.4 毒死蜱对胚胎鼠VZ 区细胞体视学参数的影响  43-46
      3.2.4.1 放射状胶质细胞HE 染色体视学测量方式  43-44
      3.2.4.2 毒死蜱对放射状胶质细胞体视学参数测量  44-46
  3.3 讨论  46-48
第四章低浓度毒死蜱对神经发生期极性蛋白的影响  48-57
  4.1 材料和方法  49-51
    4.1.1 实验试剂及药品  49
    4.1.2 主要溶液配制  49-50
    4.1.3 实验仪器  50
    4.1.4 实验动物处理和分组  50
    4.1.5 定时胚胎的获取  50
    4.1.6 胚胎石蜡常规切片步骤及HE 染色  50
    4.1.7 胚胎脑切片PAR6 免疫荧光染色  50-51
  4.2 结果分析  51-55
    4.2.1 不同胚胎时期侧脑室壁的形态结构  51-52
    4.2.2 毒死蜱对VZ 区极性蛋白Par6 表达的影响  52-53
      4.2.2.1 毒死蜱对E12 VZ 区极性蛋白Par6 表达的影响  52
      4.2.2.2 毒死蜱对E14 VZ 区极性蛋白Par6 的表达的影响  52-53
      4.2.2.3 毒死蜱对E16 VZ 区极性蛋白Par6 的表达的影响  53
    4.2.3 毒死蜱对VZ 区极性蛋白aPKC 表达的影响  53-55
      4.2.3.1 毒死蜱对E12 VZ 区极性蛋白aPKC 表达的影响  53-54
      4.2.3.2 毒死蜱对E14 VZ 区极性蛋白aPKC 表达的影响  54
      4.2.3.3 毒死蜱对E16 VZ 区极性蛋白aPKC 表达的影响  54-55
  4.3 讨论  55-57
第五章论文总结与展望  57-59
参考文献  59-67
致谢  67-68
研究生阶段发表论文情况  68

低浓度毒死蜱对发育期神经细胞极性复合体的影响

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