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白斑综合症病毒在中国对虾生产中关键传播途径调查

作　者: 邓灯
导　师: 孔杰；孔晓瑜
学　校: 中国海洋大学
专　业: 水生生物
关键词: 中国对虾白斑综合症病毒卤虫巢式PCR 传播
分类号: S945
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

92年爆发对虾白斑综合症（WSS）流行病，至今仍没有有效的治疗方法，严重制约着我国养虾业的发展，因此建立快速、灵敏的病毒检测方法，了解病毒的各种传播途径，找到病毒的宿主及传播载体从而采取有效的防病措施是有效抑制此病毒爆发的关键。通过建立中国对虾家系，利用巢式PCR法跟踪检测中国对虾亲体及后代早期幼体阶段携带白斑综合症病毒（white spot syndrom virus，WSSV）状况，发现7个家系中的4个家系Z₂期即可检测阳性；其中一组亲虾、产出的卵子及各期幼体均检测阳性。显示WSSV在中国对虾的苗种生产中可能存在从水源到幼体的横向传播途径和亲体与后代间的垂直传播途径。卤虫是虾、蟹苗种培育的关键动物性饵料，查清其能否携带白斑综合症病毒，对培育健康苗种至关重要。分离待产卵的野生卤虫，每个个体单独产卵并孵化，利用巢式体外DNA扩增技术，对卤虫（Artemia sp．）亲体和子一代成体进行WSSV病毒检测。检测结果显示：卤虫中可扩增出特异性的、与引物设计吻合的DNA片段；DNA测序分析表明，扩增片段的DNA序列与白斑综合症病毒序列一致；野生卤虫携带白斑综合症病毒的阳性率为58％，实验条件下野生卤虫的后代的阳性率为43％；同一卤虫家系中，亲代与子代携带病毒的情况不完全一致，不能确定白斑综合症病毒可否通过繁殖在卤虫世代间进行垂直传播。为了证明携带WSSV病毒的卤虫能否对中国对虾虾起到致病作用，对卤虫进行投喂（浸泡）感染，并用感染卤虫进行中国对虾投喂实验。卤虫病理切片观察结果显示，感染试验后的卤虫细胞核没有显著深染及核肿大现象，但无论是横切还是纵切均显示有上皮脱落、部分组织结构松散、细胞结构不完整现象；PCR检测结果呈强阳性，证明卤虫可以携带WSSV病毒。中国对虾摄食感染卤虫后，各组受试对虾阳性感染率的单因素方差分析结果表明，WSSV通过卤虫可导致对虾携带病毒。通过对中国对虾家系、卤虫的检测及感染试验，证明了WSSV在中国对虾苗种培白斑综合症病毒在中国对虾生产中关键传播途径调查育期可能存在水平传播和垂直传播2条途径;WssV在卤虫世代间可进行传播，携带WSSV的卤虫可造成中国对虾感染WSSV。实验结果显示，传统的中国对虾苗种生产工艺需针对WSSV的传播进行改善;仔虾和幼虾投喂成体卤虫应经过严格检疫。制作含有经过检疫的卤虫的微囊饵料作为卤虫及其他鲜活饵料的替代品有利于WSSV的防治。

全文目录

摘要  5-7
ABSTRACT  7-9
第一章对虾白斑综合症病毒(WSSV)研究进展  9-30
  1. WSSV的命名和分类  9-10
  2. WSSV的大小和形态结构  10-12
  3. WSSV引起的症状及靶器官研究  12-13
  4. WSSV的多肽组成及基因研究  13-15
  5. WSSV的理化性质  15-16
  6. WSSV的致病机理探讨  16-17
  7. 对虾病毒病的诊断方法  17-19
    7.1 病理学检测  17
    7.2 免疫学检测  17-18
    7.3 核酸检测  18-19
  8. WSSV传播途径及宿主  19-22
    8.1 WSSV的宿主  19
    8.2 WSSV的传播途径  19-22
      8.2.1 水平传播  20-21
      8.2.2 垂直传播  21-22
  9. WSSV病毒病的预防措施  22-23
  参考文献  23-30
第二章中国对虾(Fenneropenaeus chinensis)亲虾及幼体WSSV跟踪调查  30-37
  1. 材料与方法  30-32
    1.1 样品的采集  30-31
    1.2 方法  31-32
      1.2.1 基因组DNA的提取  31
      1.2.2 PCR引物  31
      1.2.3 DNA的PCR扩增  31-32
      1.2.4 电泳  32
      1.2.5 PCR扩增试验  32
      1.2.6 PCR法的检出界限  32
  2. 结果  32-35
    2.1 引物的嵌套位置  32-33
    2.2 PCR法的检出灵敏度  33-34
    2.3 各家系跟踪检测状况  34-35
  3. 讨论  35-37
第三章卤虫(Artemia sp.)作为WSSV可能载体的研究  37-52
  第一节卤虫(Artemia sp.)携带白斑综合症病毒的研究  37-44
    1. 材料与方法  38
      1.1 实验卤虫(Artemia sp.)  38
      1.2 样品DNA的提取  38
      1.3 巢式PCR扩增与电泳检测  38
      1.4 扩增片段测序比较  38
    2. 结果  38-40
      2.1 卤虫亲子代WSSV检测结果  38-40
      2.2 扩增片段测序对比结果  40
    3. 讨论  40-44
  第二节卤虫(Artemia sp.)在WSSV病毒病传播中的作用  44-52
    1. 材料和方法  44-46
      1.1 实验材料  44-45
      1.2 病毒粗提液的制备  45
      1.3 攻毒实验  45
      1.4 巢式PCR法及病理组织切片检测  45-46
      1.5 数据处理  46
    2. 结果  46-48
      2.1 病料活性检验  46
      2.2 卤虫PCR及组织切片结果  46-47
      2.3 实验虾死亡及病检结果  47-48
      2.4 软件分析处理结果  48
    3. 讨论  48-52
      3.1 实验目的和方法的探讨  49
      3.2 各实验组PCR检测结果及SPSS分析结果的讨论  49-50
      3.3 卤虫病理切片观察的讨论  50
      3.4 小结  50-52
参考文献  52-55
附录  55-57
致谢  57-58

白斑综合症病毒在中国对虾生产中关键传播途径调查

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